细胞悬液法与组织块埋植法制作兔vx2肝癌影像模型的对照研究

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1、细胞悬液法与组织块埋植法制作兔VX2肝癌影像模型的对照研究郭兴丁伟李雪鹏宋惠坤【摘要】　　目的：通过对照细胞悬液法与组织块埋植法，选择较合理的兔VX2肝癌模型的造模方法。方法：取传代荷瘤VX2种兔，分离肿瘤，制备肿瘤细胞悬液和肿瘤组织块，取新西兰大白兔各10只，分别经超声导引肝内注射和开腹肝内组织块埋植，3周后处死模型兔，观察原位肿瘤大小，肝内、腹腔及肺部转移情况。结果：两种方法造模，成模率均为100％；组织块埋植法组原位肿瘤体积明显大于细胞悬液组；组织块埋植造模较少引起异位种植，肿瘤生长较为均一

2、。结论：组织块埋植法优于细胞悬液法。【关键词】VX2肝癌动物模型　　AbstractObjective:TochooseabettermethodtomakearabbitVX2livercancermodelthroughcellsuspensioninjectingandtissuelumpembedding.Methods：AfterseparatingthetumorsincancerbearingVX2rabbit,cellssuspensionandtissuelumppsbedded

3、intoanothertenNeodelrabbitsors,intra-liver,enterocoelia,belloentratioofVX2modelethods.Thesizeoftumorintissuelumpembeddinggroupuchlessintissuelumpembeddinggroup,andthetumors.Conclusion：Themethodoftissuelumpembeddingodel　　VX2肿瘤细胞株是由shope病毒诱发兔乳头状瘤衍生的鳞状细胞

4、癌，经过移植传72代后正式建株、命名〔１，２〕。由于兔缺乏对VX2细胞的免疫，可直接移植至肝、肾、肌肉等器官建立原位模型〔３〕，是目前较常使用的医学影像模型。文献报道VX2肝癌模型的制作方法主要包括细胞悬液法和组织块埋植法，本研究通过两种造模方法对照，以探讨较为简便实用，成模率高的模型制作方法。　　1材料和方法　　1.1材料　　新西兰大白兔40只，2kg～2.2kg，雌雄各半，四川大学实验动物中心提供,合格证号：10）荷瘤VX2种兔(由华中科技大学介入科冯敢生教授惠赠)，超声诊断仪（惠普HDI50

5、00，美国），CO2孵箱(SANYO,MCO-17A2,日本)，倒置显微镜（OLYMPUS,日本），血细胞计数板，DMEM培养液（自制），PBS缓冲液（自制），显微手术器械。　　1.2方法　　1.2.1细胞悬液及肿瘤组织块制备：取传代中大腿荷瘤种兔一只，提前一天大腿内侧备皮，腹腔内注射10％水合氯醛2.5mL/kg，安定2.5mg/kg，麻醉后，碘伏大腿内侧及腹股沟区消毒，剪开局部皮肤，分离皮下组织，细心分离肿瘤，将肿瘤完整取出。剪开肿瘤，置于37℃PBS缓冲液的培养皿中，用解剖镊细心分离肿瘤组织

6、，将血管及坏死组织分离清除干净，置于盛DMEM培养液的培养皿中，取鱼肉样肿瘤组织分别制备细胞悬液和组织块：用眼科剪剪碎成约1mm３大小，2mL匀浆器匀浆，制备细胞悬液，血细胞计数板计数，DMEM培养液调整细胞浓度，达到>107cell/mL；将肿瘤组织剪成约4mm×4mm×4mm大小组织块，置DMEM培养液中。细胞悬液及组织块制备完成后，放入5％CO2孵箱待用。以上操作在超净工作台完成，保证无菌。　　1.2.2肿瘤肝内接种：健康2kg～2.2kg新西兰大白兔20只，随机数字表法随机分为组织块

7、组和细胞悬液组，分别采取如下方法行肿瘤接种，组织块组：兔上腹部提前一天备皮，麻醉后固定于兔台，消毒上腹部皮肤、铺无菌单，剑突下3cm纵行切开约2cm～3cm切口，暴露肝脏，用手术刀柄将肝左外叶轻轻挑出，使用1号丝线穿过肝脏，慢慢将肝脏拉出切口，无菌纱布保护切口，在肝左外叶有肝左中叶覆盖部分用眼科剪剪约0.5cm的小口，用解剖镊伸入切口沿肝脏走行方向造成深约1cm的隧道，镊取已经准备好的4mm×4mm×4mm的肿瘤组织塞入隧道内，剪取一小块明胶海绵填堵切口。抽出一号丝线，将肝脏慢慢送入腹腔后关腹;细

8、胞悬液组：动物术前准备同前组，固定、麻醉完成后，置于超声检查床，抽取细胞悬液0.2mL，超声导引下经皮穿刺，将细胞悬液注入肝左外叶。接种完成后连续3d肌注青霉素5万U/kg，庆大霉素2.5mg/kg(或0.25万U/kg)。　　1.2.3成瘤观察：按以上两种方法接种完成后，送动物室饲养3周，按肿瘤接种麻醉方法麻醉荷瘤兔，触摸心脏波动最强烈部位，用10mL注射器心脏穿刺，注射空气，处死。剖腹，观察腹腔内肝外脏器、腹腔（包括壁层腹膜及网膜）及腹壁有无肿瘤种植，并记录。分离肝脏将肝脏完整