肌动蛋白和神经元特异性烯醇化酶在腺样囊性癌中表达的免疫电镜研究

《肌动蛋白和神经元特异性烯醇化酶在腺样囊性癌中表达的免疫电镜研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、肌动蛋白和神经元特异性烯醇化酶在腺样囊性癌中表达的免疫电镜研究作者：张凡常永霞刘春秀李瑞平【摘要】　　目的研究肌动蛋白(MA)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)在腺样囊性癌（ACC）中的表达。方法利用免疫电镜技术从超微结构水平研究MA和NSE在14例ACC中的表达。结果MA主要表达于腺样囊性癌的细胞质中,NSE表达于ACC的细胞质和细胞核上，MA阳性细胞与NSE阳性细胞具有相似的超微结构，NSE阳性细胞的超微结构符合肌上皮细胞的超微结构特点。结论发生神经膜细胞分化的ACC细胞是其中的肌上皮成分。【关键词

2、】腺样囊性癌;神经细丝酸性蛋白;肌动蛋白;免疫电镜【Abstract】ObjectiveTostudytheexpressionsofmuscleactin(MA)andneuronspecificenolase(NSE)inadenoidcysticcarcinoma,andtherelationshipbetyoepithelialcells.MethodsUltrastructurallocalizationofMAandNSEexpressioninedbyimmunoelectronmicr

3、oscopy.ResultsMAsandNSEsandnuclEi.TheultrastructuresofNSEpositivecellsilaryoepithelialcells.ConclusionsSchyoepithelialcellsofadenoidcysticcarcinomas.【Keya;GlialfibrillaryacidicprotEIn;Muscleactin;Immunoelectronmicroscopy　　腺样囊性癌(ACC)是一种常见的涎腺恶性肿瘤,极易沿神经生长并

4、侵袭神经，其嗜神经侵袭性及其跳跃性生长使ACC的彻底治疗极为困难,因此研究ACC的嗜神经侵袭性具有重要意义。肿瘤细胞的神经膜分化可能与其侵袭神经有关，而且通过神经膜细胞标记物神经细丝酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色，发现ACC的嗜神经侵袭可能与ACC细胞发生了神经膜细胞分化有关,但由于光镜观察的局限性,究竟ACC中是否存在神经元特异性烯醇化酶（NSE）的表达仍有待研究。务外神经侵犯可能与肿瘤细胞向神经主动运动有关，而肌动蛋白(MA)则是目前细胞胞质内标记物，与细胞存在运动功能密切相关，为了证实ACC中

5、的神经膜细胞分化与肌上皮细胞的关系,本研究采用免疫电镜技术从超微水平观察NSE和MA在ACC中的表达，为神经侵犯的分子机制提供理论基础。　　1材料与方法　　1.1标本来源　　14例ACC标本取自本院2007年1月至2007年10月颌面外科住院手术患者,男性8例，女性6例，平均年龄45.3岁；经术前活检病理证实，其中实体型5例，筛状型6例，混合行3例，神经侵犯1例；术中避开坏死区切取标本后立即固定于0.05%戊二醛与4%多聚甲醛中2h。　　1.2实验步骤　　标本固定2h后即进行振动切片,30%蔗糖冲洗液

6、冲洗4h,液氮冻融,0.1mol/LPBS缓冲液洗30min,5%牛血清白蛋白和5%羊血清封闭1.5h,切片加入小鼠抗人NSE多克隆抗体和小鼠抗人MA单克隆抗体后于常温下过夜(一抗均用5%牛血清白蛋白和5%羊血清配制)。第2天,0.1mol/LPBS缓冲液洗30min后加入二抗(IgG2胶体金复合物),常温下放置1d。第3天,0.1mol/LPBS缓冲液洗30min,2%戊二醛固定45min,去离子水洗7次,银加强,去离子水洗7次,0.1mol/LPBS缓冲液洗30min,0.5%锇酸固定1h,0.1

7、mol/LPBS缓冲液洗30min，梯度脱水,于EPON812环氧树脂包埋剂中过夜。第4天,EPON812环氧树脂包埋,并于37℃、45℃及60℃下各聚合12、12、24h。第7天,光镜下定位,超薄切片,切片厚度为70nm,最后切片经醋酸铀和柠檬酸铅复染后,电镜下观察。每例标本各取2张切片分别采用0.1mol/LPBS缓冲液代替一抗作空白对照。　　1.3试剂和仪器　　NSE多克隆抗体(DAKO,丹麦,工作浓度1∶50)、小鼠抗人MA单克隆抗体(DAKO,丹麦,工作浓度1∶50)，日本电子JEM2100

8、型电子显微镜。　　2结果　　2.1光镜观察　　光镜下半薄切片观察肿瘤细胞，可见大小不等的细胞巢或实心团块,部分标本上皮细胞巢内有许多圆形腔隙,形成筛孔状结构，有的肿瘤细胞形成实心团块和筛状两种结构；MA阳性细胞和NSE阳性细胞均散在分布于肿瘤细胞巢中或环形分布于筛孔状结构的周边，其中神经侵犯的肿瘤细胞呈现MA和NSE的强阳性表达。　　2.2电镜观察　　肿瘤主要由2种形态不同的细胞组成,一类为立方状细胞,细胞轮廓比较规则,胞核呈圆形和卵圆形,这类细胞NSE