四节基因的表达调控与癌基因

四节基因的表达调控与癌基因

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1、第四节基因的表达调控与癌基因基因表达=基因转录+翻译基因表达的调控:生物体随时调整不同基因的表达状态,以适应环境、维持生长和发育需要基因的表达调控包括基因水平的调控转录水平的调控转录产物加工的调控mRNA从细胞核向胞质转运过程的调控翻译水平的调控以及翻译后的加工等基因表达的调控方式阻遏负调控:调控蛋白+DNA序列基因的表达(相应蛋白质降低)促进正调控:调控蛋白+DNA序列基因的表达(相应蛋白质增加)一原核生物基因表达的调控方式特点调控机制--操纵子正调控负调控转录翻译偶联快速乳糖操纵子--负、正调控转录起始的调控色氨酸操纵子--负调控转录终止的调控一个操纵子=编码序列(2-

2、6)+启动序列+操纵序列+(其他调节序列)操纵子:原核生物中几个功能相关的结构基因成簇串联排列组成的一个基因表达的协同单位启动子操纵序列多个结构基因终止子5’3’调控区结合RNA聚合酶和调节蛋白编码功能相关的蛋白质介导转录终止转录出多顺反子mRNA,翻译后得到多种蛋白质操纵子的基本结构启动子P操纵序列O终止子5’3’CAP结合位点三个结构基因ZYAβ半乳糖苷酶乳糖通透酶乙酰化酶乳糖操纵子转录调控机制(一)乳糖操纵子的结构5’PIP操纵序列O终止子3’CAP结合位点ZYA阻遏蛋白I×别乳糖(或IPTG)乳糖mRNA转变5’PIP操纵序列O终止子3’CAP结合位点ZYA阻遏蛋白

3、×I(二)阻遏蛋白的负性调节1.阻遏2.去阻遏启动子P操纵序列O终止子ZYAcAMPCAPcAMPCAPRNA聚合酶CAP结合位点mRNA5‘3‘2.高葡萄糖浓度5’启动子P操纵序列O终止子3’CAP结合位点ZYA×cAMP×1.低葡萄糖浓度(三)CAP-cAMP的正性调节二真核生物基因表达的调控(一)转录前基因水平的调控(二)转录水平的调控(三)转录后水平的调控(四)翻译水平的调控(五)翻译后蛋白质的加工(一)转录前基因水平的调控1对核酸酶敏感,活化基因区易被DNaseI降解2DNA拓扑结构发生变化3DNA碱基修饰呈低甲基化状态4组蛋白的变化(二)转录水平的调控启动子沉默

4、子增强子a.启动子:RNA聚合酶和基本转录因子识别和结合的部位,它们在启动子上组装成转录起始复合物b.增强子:长度为100-200bp的含有特异的重复的DNA短片段,是一些特异的转录活化因子结合部位,可增强相关基因的转录活性。c.沉默子:为负性调控元件。特异的蛋白质因子与沉默子结合后可抑制基因转录起始。顺式作用元件:DNA上的一段特定序列,可以和转录因子特异性结合。2.反式作用因子:与顺式作用元件特异结合的蛋白质,可调节基因转录活性转录因子启动子结构基因增强子沉默子转录因子RNA聚合酶IImRNA三.癌基因与抑癌基因(一)癌基因的发现与分类癌基因:是一类普遍存在于正常细胞内

5、调控细胞增殖和分化的重要基因当它受到物理、化学或病毒等因素的作用,被“活化”而失去正常功能时才会导致正常细胞的恶性转化原癌基因:在正常细胞中以非激活形式存在的癌基因癌基因产物在细胞内的定位sis胞浆功能PDGFerb-B质膜EGF受体ras胞浆具有G蛋白功能fosjun细胞核转录因子部分癌基因的定位与功能(二)原癌基因的激活1.基因突变:各种理化因素造成的DNA损伤与突变2.基因重排:基因易位3.基因扩增:4.基因插入:(三)抑癌基因1.视网膜母细胞瘤(Rb)基因Rb基因P105Rb蛋白去磷酸化形式磷酸化形式促进细胞分裂抑制细胞分裂2.P53基因P53基因P53蛋白分子量为

6、53Kd调节细胞周期抑癌基因染色体定位RB113q1相关肿瘤视网膜母细胞瘤,肺癌等p5317p肺癌,肝癌等BRCA117q21乳腺癌p169q21黑色素瘤部分抑癌基因第五节基因重组、基因诊断与基因治疗一、重组DNA(基因工程)在体外按照一定的目的和方案对DNA分子进行人工操作,将同一来源或异源的基因进行重组,然后把他们引入适当的受体细胞中,随着细胞的繁殖,DNA重组体得到扩增,并同时得到表达(一)重组DNA常用的工具酶1.限制性内切酶限制性内切酶专一性来源BamHIHindIIIEcoRI5’•••GGATTC•••3’5’•••GAATTC•••3’5’•••AAGCTT

7、•••3’3’•••CCTAGG•••5’5’•••CTTAAG•••3’5’•••TTCGAA•••3’液化芽孢杆菌大肠杆菌Ry13流感嗜血杆菌Rd分子克隆:将单一基因引入适当的受体细胞基因组DNA中,使其进行复制,从而重组DNA的大量拷贝。基因基因组DNA复制重组DNA(二)重组DNA中常用的载体1.质粒:细菌染色体外能自主复制的小分子DNA,多为环状双链结构克隆载体:能携带外源基因进入受体细胞,并能在受体细胞内复制和表达的DNA分子自主复制2.噬菌体DNA:可在细菌内复制3.病毒:可在宿主细胞内复制4.酵母人

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