《荧光分析法 》ppt课件

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1、第一节基本原理一、分子荧光（一）分子荧光的产生1．分子的电子能级与激发过程=hcES0S1*T1*电子能级的多重性M＝2s＋1吸收振动驰豫荧光内转换外转换磷光体系间跨越（二）激发光谱与发射光谱excitationspectrum横坐标ex，纵坐标发射光强度fluorescencespectrum横坐标em，纵坐标发射光强度溶液荧光光谱的特征Stokesshift荧光光谱的形状与激发波长无关荧光光谱与激发光谱的镜像关系二、荧光与分子结构荧光寿命(f)和荧光效率(f)Ft=F0e-t/flnF0Ftf=发射荧光的光子

2、数吸收激发光的光子数一般物质f0~1之间有机化合物分子结构与荧光的关系长共轭结构刚性和共平面性取代基荧光试剂荧光胺Dansyl-Cl邻苯二甲醛(OPA)测定无机离子的荧光试剂三、影响荧光强度的外部因素温度溶剂pH值荧光熄灭散射光极性溶剂溶剂粘度瑞利散射拉曼上式荧光熄灭剂荧光自熄灭选择适当的激发波长可消除拉曼光的干扰第二节荧光定量分析方法一、荧光强度与物质浓度的关系F=K’(I0-I)I=I010-ECLF=K’I0(1-10-ECL)=K’I0(1-e-2.3ECL)若c很小，Ecl≤0.05则F=2.3K’I0Ecl=KcF=2

3、.3K’I0ECl=KCECl≤0.05FCECl>0.05F与C不成正比荧光分析法的灵敏度高于紫外-可见分光光度法FA=-lgT=-lgI/I0荧光法紫外法二、定量分析方法1.标准曲线法2.比例法（对比法）3.多组分分析—多组分分析用空白溶液调零用标准溶液调满刻度第三节仪器与其他荧光分析技术一、荧光分光光度计滤光片荧光计滤光片—单色器荧光分光光度计仪器的校正灵敏度波长激发光谱和荧光光谱以能被检出的最低信号来表示在选定条件下用稳定荧光物质校正用汞灯标准谱线校正双光束仪器时，误差可抵消二、其他荧光分析技术简介1.激光荧光分析2.时间

4、分辨荧光3.同步荧光分析4.胶束增敏荧光