免疫重组dna技术

《免疫重组dna技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、RecombinantDNATechnologyIdentificationofrecombinantclones相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎:http://www.fantibody.comfantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台需要相关的实验室仪器设备

2、、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网http://www.biomean.com进行咨询，期待您的加入1.ScreeningTheprocessofidentifyingoneparticularclonecontainingthegeneofinterestfromamongtheverylargenumberofothersinthegenelibrary.byinsertioninactivation;byalpha-complementation;bynewchar

3、acteristicsgeneratedbyinsertedgenes;bydifferentkindsofmolecularhybridization;byimmunochemistrytechnology.1.InsertioninactivationvectorcarryingtwoormoreantibioticresistancegenescloningsiteswithintheoneofantibioticresistancegenedisruptionofgenebyinsertionoftheforeignDN

4、ApBR322（1）Tetracyclin(四环素)：（2）Ampicilin(氨苄青霉素抗性基因)：Example:pBR322plasmid产生-内酰胺酶，使氨苄青霉素转变为青霉酮酸，使碘-青霉素指示液（I2-KI-Ampicillin）（蓝灰色）褪色。抑制细菌生长，但不杀死细菌。杀死生长的细菌，但不杀死停止生长的细菌。（3）Cycloserine(环丝氨酸)：如果在Tetr上插入外源DNA，导致四环素抗性基因失活，可用四环素加环丝氨酸平板培养基选择重组克隆。Tetr失活的菌生长被四环素抑制，不被环丝氨酸杀死，保留下来；T

5、etr不失活的菌抗四环素，能分裂生长，反而被环丝氨酸杀死。（1）四环素抗性插入失活无环丝氨酸培养基（2）氨苄青霉素抗性插入失活选择过程如果Ampr上插入外源DNA，导致氨苄青霉素抗性基因失活，可用碘-青霉素指示液选择。2.alpha-complementationhttp://www.eppendorfna.com/applications/images/gel_cleanup1.jpgvectorcarryinglacZgene–encodesforN-terminusofβ-galactosidase(α-fragment)

6、hostchromosomecarryingC-terminalofβ-galactosidase(ω-fragment)IPTG(isopropyl-[beta]-D-thiogalactopyranoside)–inducerX-Gal–substratefortheenzymecloningsiteswithintheLacZgenedisruptionofgenebyinsertionoftheforeignDNAblue–functionalproteinwhite–non-functionalprotein-半乳糖

7、苷酶乳糖半乳糖葡萄糖Xgal半乳糖5-溴-4-氯靛蓝++深蓝色1.原理：载体上有一段-半乳糖苷酶基因（LacZ）的片段（氨基端），其上有外源DNA的插入位点。受体菌基因组中有突变的-半乳糖苷酶基因（片段缺失）。可以被IPTG诱导表达。载体和受体菌基因组可以互补形成完整有功能的-半乳糖苷酶。Procudure:Selectthewhiteclones利用插入的外源基因的表达产物特性进行直接选择。（只在特定条件下）。转化进来的外源基因产物能够弥补受体菌株的突变型缺陷。3.1弥补缺陷his-his+受体菌：外源基因：在不含组

8、氨酸的培养基中生长3.Selectionbynewcharacteristicsgeneratedbyinsertedgenes小鼠的二轻叶酸还原酶（DHFR）对三甲氧苄二氨嘧啶有抗性。DHFR载体连接转化受体菌三甲氧苄二氨嘧啶培养基平板含DHFR的克隆才能生长