荧光原位杂交技术在判断异基因造血干细胞移植预后中的应用

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1、焚光原位杂交技术在判断异基因造血干细胞移植预后中的应用莫耀禧莫伟英张鹏（广西壮族自治区人民医院生殖屮心530021）【摘要】R的：研宂分析荧光原位杂交技术在判断异棊因造血干细胞移植预后屮的应用效果，为异基因造血干细胞移植预后的有效判断提供相应的借鉴以及参考。方法：选取本院2011年11月至2012年11月的76例异基因外周血干细胞移植、脐血移植、骨髓移植、多种干细胞联合移植标本。收集标准为融合棊因（BCR/ABL、AML1/ETO）阳性表达，受体的性别需要不一致，或者是满足上述两项条件的，将这些移植标本分为同性别间干细胞移植、不同性别间干细胞移植两

2、个组。同性别间干细胞移植者使用相应的基因探针进行检查。不同性别间干细胞移植者检测需要使用基因探针或者是联合使用XY染色体探针。结果：在53例异性allo-HSCT的受者屮有，31例供、受者骨髓嵌合率≥99.00%，16例早期嵌合率偏低在81.32%到97.68%,经过随访，嵌合率有了明显的上升，上升到≥99.00%,微量残留病灶（MRD＞呈阴性，在接受移植之后，之前的病不再复发。6例早期嵌合率偏低分为为99.00%至100.00%,但是出现逐渐卜降的趋势，其屮MRD比例呈上升趋势。23例供、受者性别相同allo-HSCT受者屮有16例在

3、进行移植之后没有检测到之前的基因异常情况。3例被检出有少量的残留病灶，在接受免疫抑制剂进行减量治疗或者供者淋巴细胞输注治疗之后明显卜降，现在还在缓解治疗屮。4例在进行移植之后3个月左右出现原来的基因异常情况，在进行复查的时候发现为原病复发骨髓。结论：荧光原位杂交技术操作简单、快捷、准确性高并且还存在很强的特异性，在判断异基因造血干细胞移植预后屮，具有非常好的应用效果。【关键词】荧光原位杂交技术异基因造血干细胞移植预后应用效果【中图分类号】R319【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2014)21-0360-02临床上骨髓移植是在二十世纪

4、流失年代取得成功的，造血干细胞移植的分为有所拓展，从开始的骨髓移植扩展到外周血干细胞移植、脐血移植、骨髓移植等多种类型的干细胞联合移植。在进行移植之后，按照植入的状态去研究分析移植是否成功，使用移植后免疫抑制剂需要严格规定执行［1】。需要在移植之前深入的了解供者淋巴细胞输注(DU)的时机和数量同时也要掌握预防移植物抗宿主病(GVHD)以及监测疾病状态，这是非常重要的准备工作，冋吋也起着不可或缺的重要作用。荧光原位杂交技术相对苏他的技术而言，较为快速、简单，同吋具有较高的准确性和特异性。所以，在血液系统疾病的遗传学的临床检测中得到了很好的应用。本研使

5、用X、Y性染色体特异性探针以及序列特异性探针双色双融合间期荧光原位杂交技术，对异基因造血干细胞移植病例的嵌合率进行相应的检测，同时评估其预后情况，现作如下报道。1资料与方法1.1基本资料选取本院2011年11月至2012年11月的异基因外周血干细胞移植、脐血移植、骨髓移植、多种干细胞联合移植标本共计76例。其中男性有42例，女性有34例。选取标准：供、受者性别不同、基因融合(BCR/ABL、AML1/ETO)阳性表达，或者是满足上述的两个条件。其中23例同性别间移植,53例不同性别间移植。其中原发病有50例慢性粒细胞白血病(CML),12例急性非淋

6、巴细胞白血病(AML1/ETO+AML)、14例急性淋巴细胞白血病(BCR/ABL+ALL)。1.2检测方法1.2.1一般检测76例allo-HSCT的受者在接受移植二十八天之后，进行骨髓的采集，荧光原位杂交技术检测受者的融合基因以及性染色体，借此对供、受者骨髓的嵌合状态进行评价，同时观察微量残留病灶的比例，之后还要经过一定吋期的随访观察。23例冋性别间移植，存在特殊染色体异常的allo-HSCT受者，需要使用荧光原位杂交技术检测是否存在微量残留病灶［2】。与此同时，53例不同性别间移植异性allo-HSCT受者也需要进行融合基因以及骨髓嵌合状态检

7、测。1.2.2检测方法通过X、丫性染色体特异性探针以及序列特异性探针双色双融合间期荧光原位杂交技术的使用。从英国的Cyocell公司挑选购入X、丫性染色体着丝粒特异性DNA探针以及双色双融合融合基因DNA探针(BCR/ABL、AML1/ETO)。BCR以及X标记荧绿色，ABL以及丫探针则标记为红荧色，按照试剂盒上详细的操作说明进行相应的操作，在此过程中需要做好标本的处理、杂交、变性等工作。最后将详细的信息记录下来，并II组织专业人员进行分析。2结果在移植二十八天之后，第一次进行荧光原位杂交技术检测的结果。3讨论通过使用荧光原位杂交技术，不同比例的供

8、、受者源性染色体可以清晰的显示出来，同时也可以将嵌合体状态和程度显示出来。在临床工作中，存在MRD跟嵌合率难以吻合，无法同