免疫学实验供临床医学本科

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1、免疫学实验（供临床医学本科用）基础医学院免疫学教研室李念虹Email:lnh666"lnh666@126.com教材高等医学院校基础医学实验教学系列教材≪免疫学实验≫科学出版社，2008年6月主编朱道银，吴玉章临床医学本科实验内容及安排实验课内容学时数录像1凝集反应42沉淀反应4有3免疫标记技术4有4免疫酶斑点试验4有非临床医学本科实验内容及安排实验课内容学时数录像1凝集反应42沉淀反应4有3免疫标记技术4有一、免疫学实验注意事项1.学生进实验室必须穿白大褂，不得穿拖鞋。2.学生在实验过程中应遵守实验操作规程和实验

2、室秩序，按要求完成实验。3.学生应爱护实验设备、器材等公物，厉行节约；若损坏实验用品，要及时报告。4.需回收的玻璃器材如载玻片等，放于指定陶瓷缸内；废弃的使用品仍-入垃圾桶内。5.实验结束，清理好桌面，由班干部安排值日学生做清洁；做完清洁，关好水电、门窗，由带教老师检查认可后，值日学生方可离去。二、免疫实验课目的1.验证所学理论知识。2.训练基本操作技能，培养独立工作能力。三、要求1.严肃认真。2.多想、多看、多做。3.当堂完成实验报告。四、Ag-Ab反应的相关知识血清学反应——即体外进行的Ag-Ab反应。由于机体

3、绝大部分抗体存在于血清中，故称之为血清学反应。1.Ag-Ab反应的基本原则（1）用已知抗体检测未知抗原；（2）用已知抗原检测未知抗体。2.Ag-Ab反应的特点：（1）特异性（2）可逆性（3）可见性3.影响Ag-Ab反应的因素（1）电解质：0.85%NaCl（2）酸碱度：pH6～8（3）温度：37℃4.Ag-Ab反应类型：（1）凝集反应（2）沉淀反应（3）补体结合反应（4）中和反应（5）免疫标记技术4大经典免疫实验实验一凝集反应一、目的要求1.掌握血清学反应概念、特点。2.熟悉凝集反应的概念、常用凝集反应的实验方法及

4、结果判定。3.了解凝集反应的原理、类型及其用途。二、实验内容1.直接凝集试验(玻片法)——ABO血型鉴定(每人做)2.间接凝集试验——类风湿因子检测(小组做)三、凝集反应相关知识（一）概念颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体结合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应。颗粒性Ag又称凝集原相应Ab又称凝集素·颗粒性抗原：光镜下可见，肉眼观呈浑浊悬液，如细菌、RBC等。·可溶性抗原：光镜下无形态，肉眼观呈澄清透明，如蛋白质、多糖抗原等。（二）凝集反应类型1.直接凝集反应2.间接凝集反应1.直接凝集——玻片法

5、已知Ab,测Ag，为定性实验；用途：鉴定菌种、菌种分型、血型鉴定。——试管法（如肥达氏反应）已知Ag,测Ab，为半定量实验；用途：辅助诊断肠热症等。2.间接凝集反应RBC——间接血凝试验用途：某些病毒感染和变态反应患者血清中的相抗体量。乳胶——间接乳胶凝集试验用途：检测类风湿因子等。间接凝集抑制试验——妊娠试验（已知）（已知）（已知）（已知）反向间接凝集试验——某些传染病和原发性肝癌的早期诊断。四、实验操作内容（一）玻片法——ABO血型鉴定（每人做）用已知血型Ab,测未知血型Ag；为定性实验。ABO血型系统血型红细

6、胞表面的血型Ag血清中的血型AbA型A抗BB型B抗AAB型A、B—O型—抗A、抗B1.材料已知Ab：标准血清——抗A、抗B待测Ag：红细胞血型抗原2.操作步骤(1)无菌操作采血(无名指尖)于NS试管→形成约2～5%红细胞(RBC)悬液；(2)准备1张载波片；(3)加血清(Ab)各1滴；(4)加RBC各1滴；(5)摇晃混匀；(6)结果判断(10-15分钟后)。3.结果判断凝集者：出现红色颗粒状或块状凝集物；不凝集者：呈红色均匀混浊。(1)若抗A凝集，抗B不凝集——A型血(2)若抗A不凝集，抗B凝集——B型血(3)若抗

7、A、抗B均凝集——AB型血(4)若抗A、抗B均不凝集——O型血在白背景上观察凝集不凝集4.注意事项(1)适度的RBC悬液浓度，约2-5%；(2)抗A和抗B不能混用；(3)在白色背景上观察效果较好。（二）间接乳胶凝集试验—类风湿因子检测类风湿关节炎患者血清中存在：变性IgG—Ag抗变性IgG抗体(类风湿因子)—Ab临床上用检测类风湿因子以辅助诊断类风湿关节炎。1.材料已知Ag：致敏乳胶(乳胶颗粒表面有变性IgG)待测Ab：待检血清中的类风湿因子待测Ab已知Ag2.检测步骤：(1)取黑底纸片三片；(2)加待测血清、阳性

8、和阴性对照血清各1滴；(3)各加1滴致敏乳胶,用牙签混匀；(4)5分钟后观察结果，以黑背景观察为佳。阳性者现象：呈乳白色细沙状（乳胶凝集）；阴性者现象：呈乳白色均匀混浊。完成实验报告实验一凝集反应一、直接凝集反应（玻片法）——ABO血型鉴定1.材料2.操作步骤3.结果判断（自己的血型）4.实验讨论二、间接凝集反应——类风湿因子测定1.材料2.操作步骤3.结果