老年膀胱癌细胞中心体异常与p53蛋白表达的关系及意义

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1、老年膀胱癌细胞中心体异常与p53蛋白表达的关系及意义【摘要】目的研究膀胱移行细胞癌细胞中心体异常情况与p53蛋白表达的关系及临床意义。方法采用免疫组化方法，对76例膀胱移行细胞癌标本进行中心体异常和p53蛋白表达的检测。结果在76例膀胱移行细胞癌中，中心体异常阳性56.6%（43/76)和p53阳性蛋白表达63.2%(48/76)。都与肿瘤的病理分级、临床分期、肿瘤数目、有无复发及疾病进展有关(P＜0.05)；且两者之间呈正相关（r＝0.7067，P＜0.01)。结论膀胱癌细胞中心体异常与p53基因突变有关，研究二者的关系有助于加深理解肿瘤发生机制，为临床寻找新的治疗方

2、法提供基础。【关键词】中心体异常；染色体不稳(CIN)；p53；膀胱移行细胞癌膀胱癌在我国是泌尿外科最常见的恶性肿瘤，在男性占全部癌的3.1%，女性占全部癌的1.6%，其中尿路上皮肿瘤占97%以上；在尿路上皮肿瘤中，移行细胞癌占其中的90.4%。其发病率与年龄有密切关系；在40岁以下发病较少，且预后良好，60岁以后发病率逐渐增高，其生物学行为特性是容易复发，其中部分复发病例出现疾病进展〔1〕。因而在临床上寻找一种切实有效的预后指标和新的治疗方法尤为重要。本研究通过对膀胱移行细胞癌细胞中心体异常与p53蛋白表达及二者的关系的研究，以探讨其临床意义。1材料和方法1.1标本的

3、收集和选取本院2004年1月～2007年6月切除的膀胱移行细胞癌标本中选取76例老年患者进行中心体特性与p53蛋白表达的研究，同时选取其中5例标本的正常膀胱黏膜上皮作为正常对照。男42例，女34例，年龄50～86(平均66.8)岁；其中按病理分级，G116例，G239例，G321例；按临床分期，无侵犯肌层（Tis1）57例，侵犯肌层（T24）19例；其中单发肿瘤42例，多发34例；所有病例随诊6～30(平均22.8)个月，其中发现肿瘤复发39例，有疾病进展23例。本组病例均经过本校病理教研室专家组复核无误。外科手术切除的膀胱移行细胞癌标本，用10％甲醛液固定，常规石

4、蜡包埋。1.2主要试剂和染色方法第一抗体单克隆鼠抗人γ微管蛋白抗体(GTU88)(美国Sigma公司产品)，第一抗体单克隆鼠抗人p53抗体，第二抗体FITC标记山羊抗鼠IgG，SP9002免疫组化染色试剂盒，碘化丙啶(PI)，DAB显色试剂盒，封闭用正常山羊血清工作液，包被玻片用多聚赖氨酸(均为北京中杉金桥生物试剂公司产品)。中心体染色采用间接免疫荧光染色方法。p53蛋白染色采用SP三步法。具体步骤按说明书进行。每一批染色同时从研究标本中随机抽取2～4张切片，以PBS代替一抗的同步染色作为阴性对照。1.3结果判定中心体异常的计算：把具有以下特征之一的中心体判断为异常

5、中心体：①一个细胞内观察到3个或者多个中心体；②中心体的直径大于作为阴性对照的正常膀胱黏膜上皮细胞的中心体直径2倍及以上甚至出现巨块状中心体；③中心体形状异常，成长条形或线状。每一切片观察不少于100个细胞。组织切片中肿瘤细胞中心体异常数目＜5％记为阴性(CH-)，≥5％为阳性(CH+)〔2〕。p53蛋白的阳性表达判定：p53阳性表达显示在组织切片细胞中细胞核出现棕黄色颗粒为阳性，根据抗体在切片中阳性反应细胞的比例分为：阳性细胞数＜10％或完全消失的标记为()，阳性细胞数10％～90％标记为(+)；阳性细胞数＞90％标记为()。阳性细胞数的计算标准：观察500个肿瘤

6、细胞。阳性细胞数/500×100％来计算〔3〕。1.4统计学处理采用SPSS13.0统计软件进行配对χ2检验或Fisher分析。2结果图1中心体γ－微管蛋白表达于细胞核，呈绿色荧光（SP，×200）2.1p53蛋白表达阳性结果在76例膀胱移行细胞癌标本中，中心体异常阴性(CH-)33例(43.4%)，阳性(CH＋)43例(56.6%)，p53蛋白表达分别为：(-)28例(36.8%)，中心体异常阳性3例；(+)14例(18.4%)，()34例(44.8%)，中心体异常阳性为40例。中心体异常阳性，p53蛋白表达阳性分别如图1，2所示。图2p53阳性表达于细胞核，呈棕黄

7、色颗粒（SP，×200）2.2p53表达阳性折临床参数在76例膀胱移行细胞癌中，不同病理分级，临床分期，肿瘤数目（单发与多发），疾病是否进展及有无复发之间，(CH＋)和p53阳性表达都有显著差异(P＜0.05，P＜0.01)。(CH＋)和p53阳性表达与膀胱移行细胞癌其他参数之间关系见表1。2.3p53阳性表达的相关性分析在76例膀胱移行细胞癌中，(CH＋)和p53阳性表达结果之间差异不显著(P＞0.05)，但两者之间存在显著相关性（r＝0.7067，P＜0.01)。表1膀胱移行癌细胞中心体异常阳性和p53阳性与临床参数间的关系3讨论中心