《eb定量检测》ppt课件

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1、EB病毒PCR定量检测20140915李英辉内容一、EB病毒二、EB病毒相关疾病三、EB病毒与鼻咽癌四、血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷五、上市产品情况六、问题与方案七、项目计划一、EB病毒1964年Epstein、Barr在Burkitt淋巴瘤细胞系发现的第一个人类肿瘤病毒，又名人类疱疹病毒4型（HHV-4），是双连DNA病毒。世界上90%以上的成人都曾感染过EBV，大多终身在体内以无症状、潜伏感染形势存在二十世纪末被国际抗癌联盟列为Ⅰ类致癌物二、EB病毒相关疾病肿瘤性疾病Burkitt’slymphoma伯基特淋巴瘤（地方性，100%）Ho

2、dgkin’slymphoma霍奇金淋巴瘤（40%）Nasopharyngealcarcinoma鼻咽癌（地方性，100%）Gastriccarcinoma胃癌（10%）非肿瘤性疾病Infectiousmononucleosis传染性单核细胞增多症（100%）三、EB病毒与鼻咽癌鼻咽癌（NPC）属于地方性肿瘤，约80%的患者分布于中国华南地区及东南亚地区，发病率约为20-30/100000人,广东省的发病率最高,又称“广东瘤”鼻咽癌病因1、遗传2、EB病毒3、环境NEnglJMed.2004Jun10;350(24):2461-70.四、血浆E

3、B病毒DNA水平与肿瘤负荷-----分期CancerRes.2000May1;60(9):2351-5.四、血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷-----放疗过程中监控四、血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷-----术后监控ClinCancerRes.2003Aug15;9(9):3254-9.复发监控NEnglJMed.2004Jun10;350(24):2461-70.四、血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷------复发监控OSvsPlasmaEBVDNAHeadNeck.2012Aug;34(8):1064-70五、上市产品情况公司类型灵敏度线

4、性范围样品类型样本用量之江生物定性全血艾康生物定量全血普瑞康生物定量100IU/ml血清或血浆圣湘生物定量400拷贝/毫升4.0×102~4.0×109全血、血浆和咽拭子血浆100ul,全血200ul,咽拭子500ul达安基因定量500拷贝/毫升血鑫诺美迪基因定量血清或血浆六、问题与方案问题：灵敏度解决方案：1、设计靶基因检测片段小于100bp2、公司已有的血浆抽提方法3、甘油保存校准品七、计划项目内容项目指标预期完成时间查阅文献，EBV靶序列的选择EBV保守区域序列人工合成9月30引物及探针设计检测用引物、MGB探针设计合成9月30构建校准品

5、质粒克隆测序验证成功构建克隆菌10月17质粒抽提质粒抽提、线性化10月24制备校准品制备EBV校准品及内参校准品10月31引物及探针筛选优化引物11月7阳性细胞株或阳性EBVDNA样本测试阳性样本检出率100%11月14