羊肚菌多糖体外抗菌活性研究

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1、羊肚菌多糖体外抗菌活性研究龙正海，纪其雄，周惠燕【关键词】羊肚菌；,,多糖；,,抗菌活性　　摘要：目的对羊肚菌Morchellaesculenta多糖的体外抗菌活性进行初步研究。方法采用改良药基法和K-B法，对子囊果多糖(APS)、菌丝体胞内多糖(IPS)、胞外多糖(EPS)进行体外抗菌实验。结果研究表明羊肚菌多糖对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌以及放线菌的抗菌活性都比较强，而对霉菌和酵母菌的抗菌作用不明显。结论3种羊肚菌多糖均具有比较明显的抗细菌、抗放线菌活性。　　关键词：羊肚菌；多糖；抗菌活性　　Studyon

2、Anti-microbialActivitiesofPolysaccharidefromMorchellaesculentainvitro　　Abstract：ObjectivePrimarystudyonantimicrobialactivitiesofMorchellapolysaccharideinvitroiscarriedon.MethodsTheMICofpolysaccharideeasurededicine-mediumandKirbyBauerMethod.ResultsThetestindicatedt

3、hatallthetestedsampleshadanti-microbialactivitiesagaistE.coli,B.subtilis,S.aureusandA.microflavus.ConclusionStudyshoM.esculentahadstronganti-bacterialandantiactinomycespoicrobialactivities　　羊肚菌Morchellaesculenta营养丰富，是珍稀食药用真菌。现代医学研究表明多糖是其重要的活性物质之一，具有抗疲劳、抗肿瘤、抗病毒及提高机

4、体免疫力等作用〔1,2〕。目前尚未见到有关羊肚菌多糖抗菌作用方面的研究报道，本文将对羊肚菌子囊果多糖以及菌丝体胞内、胞外多糖的抗菌活性进行初步研究。　　1材料与方法　　1.1菌种来源　　1.1.1羊肚菌来源羊肚菌M.esculenta子囊果于200505分别采自浙江丽水和贵州贵阳，同时进行单孢子分离得到斜面菌种。　　1.1.2供试菌种　　大肠杆菌Escherichiacoli，枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，耐药性金黄色葡萄球菌Staphalococcusaureus，细黄放线菌Actinomycesmicr

5、oflavus，产黄青霉Penicilliumchrysogenum，米曲霉Aspergillusoryzae，热带假丝酵母Candidatropicalis，啤酒酵母Saccharomycescerevisiae均由本校微生物教研室提供。　　1.2培养方法和供试菌液制备　　1.2.1培养基　　细菌培养基：牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，NaCl0.5％，水100ml，pH7.0~7.2。真菌培养基：马铃薯20％，葡萄糖2％，水100ml，自然pH值。酵母、放线菌培养基：葡萄糖5％，蛋白胨1％，KH2PO40.3％，MgSO4

6、0.5％，水100ml，pH6.0。　　1.2.2供试菌培养供试菌种用各自液体培养基在适宜温度下培养后得到各种原菌液。　　1.2.3供试菌液制备　　用原菌液分别制备成含菌量约为107CFU/ml的供试菌液，备用。　　1.3多糖提取与测定　　1.3.1多糖提取　　取羊肚菌子囊果干品2g，加人100ml水，煮沸提取30min，冷却后2500r/min离心5min。取上清液于一烧杯中，残渣再加人100ml水，煮沸提取30min，收集上清液于同一烧杯中，残渣再重复提取1次，将3次收集的有提取液的烧杯在电炉上加热、浓缩至30ml左右

7、冷却，再加人100ml乙醇使多糖析出，沉淀30min后2500r／min离心3min，弃去上清液，残渣再加人50ml乙醇搅拌清洗后同样离心弃上清液，残渣再清洗1次后，用约80℃热水70ml溶解残渣，转移至200ml容量瓶中，冷却后定容，得到子囊果多糖液(APS)。再取羊肚菌菌丝体干品2g，同法制备成菌丝体胞内多糖液(IPS)。用真菌培养基接种羊肚菌斜面菌种在25~28℃中培养5~7d，滤去菌丝体的液体培养液于3600r/min离心20min，收集上清液。取5ml上清液，加入3倍体积的95％的乙醇，4℃静置过夜；3600r/

8、min离心10min，收集沉淀，用60℃热水溶解，定容至200ml，即得到胞外多糖液(EPS)。　　1.3.2多糖含量测定　　采用蒽酮比色法〔3〕测定多糖含量，经测定每毫升子囊果多糖液、胞内多糖液、胞外多糖液分别含有多糖2000，2500，100mg。　　1.4体外抑菌实验　　1.4.1抑菌圈的测定