不同采收季节瓶尔小草黄酮类化合物含量分析

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1、不同采收季节瓶尔小草黄酮类化合物含量分析赵保发张志信张仕秀黄保贵沐建华【摘要】　　目的确定瓶尔小草的最佳采收季节。方法对夏（8月）、秋（10月）、冬（12月）三季节采收的瓶尔小草中的总黄酮进行了提取，以芦丁为对照品，用紫外分光光度法对其含量进行了测定。结果不同季节采收的瓶尔小草中黄酮类化合物的含量有着显著的差异，夏季（8月）其含量为58.42(mg/gDethodsThispaperreportedtheextractionandthepreliminarydeterminationofflavonoidsinOphioglossumvulgatumL

2、.fromthesamplesofAugust,October,DecemberbyUV-spectrophotometryple.ResultsThecontentsofflavonoidshadsignificantdifferenceinOphioglossumvulgatumL.atdifferentseassons.ThehighestflavonoidcontentinOphioglossumvulgatumL.ofAugustg/gD十万分之一天平（日本岛津）；干燥箱CS-101-2CS（重庆实验仪器厂）；微波炉，MideaPJ21F-B

3、(C2)。　　1.2试剂芦丁对照品购于中国药品生物制品检定所；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠均为分析纯。　　1.3药材瓶尔小草全株于2006年8，10，12月采集于云南文山县杨柳井，经云南文山师范高等专科学校沐建华讲师鉴定，每次采样3次重复。　　2方法　　2.1标准曲线的制作〔3〕精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品10mg用20ml乙醇溶解后，转移到100ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀即得（每毫升溶液中含无水芦丁0.1mg）。精密吸取芦丁标准液0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0ml。分别置于50ml容量瓶中，各加水至12ml，加

4、5%NaNO2溶液2ml，混匀，放置6min,加10%Al(NO3)3溶液2ml，混匀，放置6min,加4%NaOH20ml,再加水至50ml，放置15min,以不加芦丁对照品的试剂作空白对照。按分光光度法〔4〕在503nm（全波长扫描，在503nm处有最大吸收）波长处测定吸光度。以所取标准液含有的芦丁标样量mg数和吸光度数据经回归处理，得到回归方程,回归方为程：Y=0.2196X-0.0112，相关系数r=0.9993。　　2.2黄酮类化合物的提取和测定方法〔5〕瓶尔小草粉碎（过60目筛），称取5g，用70%乙醇溶液为溶剂，浸泡24h，微波提取10m

5、in（微波加热2min，间隔1min，用于补充溶剂损耗），抽滤，提取液用70%乙醇溶液定容至200ml，取1ml按“2.1”项下方法测定吸光度，根据回归方程计算出1ml提取液中的总黄酮的mg数，按下式计算瓶尔小草中的黄酮含量(mg/gDg/gDl样品液含总黄酮量(mg)，W为样品的质量(g)。　　2.3回收率的测定准确称取夏季采收的瓶尔小草样品5g，共3份，分别加入一定量的芦丁对照品，按“2.2”操作。用紫外分光光度计测定吸光度，得出总黄酮含量，根据回收率公式计算出回收率。　　回收率（%）=混合后测得总黄酮含量-样品中总黄酮含量芦丁对照品加入量×100

6、%　　2.4精密度实验精密称取夏季瓶尔小草干粉样品5g，共6份，按“2.2”测定。　　3结果　　3.1提取溶剂乙醇浓度的选择对于总黄酮的提取率与醇溶液的浓度及黄酮类型的不同而有所差异，因此本实验做了乙醇浓度对黄酮类化合物提取率的影响的实验。取不同浓度的乙醇溶液对不同季节的瓶尔小草干粉，按照“2.2”项下方法分别提取和测定。结果见表1。　　表1乙醇浓度对FOV提取的影响（略）　　由表1可以看出，乙醇浓度为70%时，提取液中黄酮类化合物的提取率最高。本实验选择70%的乙醇为溶剂。　　3.2微波提取次数实验将经过“2.2”项下操作过滤后的残渣，重复“2.2”

7、项下操作两次，过滤后分别收集各部滤液，并按照“2.1”项下方法测定各部滤液的吸光度。结果见表2。　　表2微波提取次数对FOV提取的影响（略）　　从表2可以看出，对样品提取2次，不同季节的瓶尔小草中的黄酮类化合物提取完全。本实验选择微波提取2次。　　3.3黄酮类化合物含量的测定分别称取不同季节的瓶尔小草干粉3份，每份5g，按“2.1”和“2.2”项下方法进行提取和测定。结果见表3。　　从表3可以看出，夏、秋、冬季节的瓶尔小草中，以夏季瓶尔小草中的黄酮类化合物含量最高，若对瓶尔小草中的黄酮类化合物开发利用，应该选择夏季进行采收。3.4样品回收率实验结果见表

8、4。由表4可以看出本实验的平均回收率为99.30%，相对标准偏差（RSD%）为2.457%。