蛹虫草母种培养基配方优化的研究

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1、蛹虫草母种培养基配方优化的研究ok3ilitaris(L.)Link.]又称北冬虫夏草,北虫草,与冬虫夏草同属异种,隶属真菌门、子囊菌亚门、核菌纲、麦角菌科、虫草属,是蛹虫草真菌寄生在鳞翅目夜蛾科昆虫蛹体上形成的子座与蛹体的结合体[1-2]。蛹虫草是着名的食药用菌,具有较高药用价值,具有补肺益肾、抗疲劳、抗肿瘤、抗衰老、美容养颜等保健作用,以及显着增强免疫力的功能[3-4]。其菌体内蛋白质含量高达40%以上,氨基酸种类齐全(其中含有人体必须的8种氨基酸),并含有锌、铜、硒等多种微量元素,其维生素不但种类多,且含量极为丰富。虫草属真菌

2、的深层培养,主要目的是大批量生产菌丝体,并从培养液中提取虫草素、虫草酸、虫草多糖、甘露醇、SOD等多种有效成分[5-6]。经中国中医研究所等权威机构检测发现,蛹虫草中各种有效成分的含量均接近甚至超过冬虫夏草。近年来,人们把人工培育的蛹虫草作为冬虫夏草的替代品,以替代天然冬虫夏草的不足。研究表明,蛹虫草的菌丝体和子实体具有基本相同的有效成分及药用与滋补功效[7]。蛹虫草母种培养基的研究已有一些报道,但所述培养基各有不同,产量与品质也高低不一,这种情况严重影响其产业发展。在蛹虫草的母种培养中,培养基的配方是否优良,直接影响菌丝体的生长。

3、因此,对蛹虫草母种培养基进行优化研究,筛选出适合蛹虫草菌丝体生长的最佳母种配方具有一定的理论与实际意义。本试验以不同的研究人员试验获得的6种母种培养基为基础,以菌种初萌发时间、菌丝长速、菌丝长势、满管时间为指标,筛选出母种培养基的最佳配方,以期应用于蛹虫草的生产和科学研究。[]1材料和方法1.1菌种蛹虫草试管母种由华中农业大学微生物教研室提供。1.2主要仪器不锈钢立式压力蒸汽灭菌器,上海申安医疗器械厂生产,型号:LDZX-30FB;超净工作台,苏净集团安泰公司制造,型号:SgSO40.3g、KH2PO40.5g、VB1(50mg·L

4、-1)、蒸馏水1L、pH值5~6。1.3.2配方2葡萄糖10g、牛肉膏10g、琼脂25g、MgSO40.6g、KH2PO42g、乙酸钠5g、柠檬酸二胺2g、MnSO40.25g、吐温80mL、酵母粉5g或酵母膏10g、蒸馏水1L、pH值6.2~6.4。1.3.3配方3蛋白胨10g、牛肉膏3g、琼脂17g、NaCl5g、蒸馏水1L、pH值7.2左右。1.3.4配方4葡萄糖10g、琼脂20g、MgSO41g、KH2PO41.5g、VB1(50mg·L-1)、CaCO31g、蒸馏水1L、pH值5~6。1.3.5配方5葡萄糖15g、柠檬酸铵

5、2.5g、琼脂20g、乙酸钠5.5g、MgSO40.65g、MnSO40.3g、KH2PO41.5g、蒸馏水1L、pH值自然。1.3.6配方620%马铃薯提取液中加入1%葡萄糖、1%蛋白胨、2%琼脂、0.5%KH2PO4、0.3%MgSO4、VB1(10mg·L-1)、蒸馏水1L、pH值5.8。&nbs[1][2]下一页ok3×1cm),称质量。置沸水中煮30min,用4层纱布过滤挤压取其汁液至于烧杯中,同时加入琼脂及其它药品搅拌使其充分溶解,加水定容至1L,测定并调整酸碱度。将制备的培养基分别装入试管中,装量为管高的1/4。每种配

6、方装6支试管,塞上棉塞封口,捆扎。在压强1.14×105MPa、温度120℃下高压灭菌30min后,待高压锅的气压降至0,将试管取出冷却并搁置斜面,然后将其放入28~30℃室温中培养48h进行无菌检验。检查完毕将其置于超净工作台中备用。1.4.2接种与培养接种前将母种菌株搁置在恒温箱中活化1d,然后菌种移入接种室,在超净工作台中按无菌操作要求,向试管斜面中央接种,接种块大小为5mm×25mm。注意接种块不要碰到其它部位,以免影响菌种萌发后菌丝体的观察。每种培养基配方接6支试管。接种后移入恒温箱中培养,培养条件为18.5~19℃,无光

7、照。接种后每2d记录菌落形成及菌丝生长情况。1.4.3测定菌丝长速菌丝长速是菌丝生长的指标。将菌丝接种到斜面培养基中,每天测量1次菌落直径,直至菌落满管为止。观察并记录每种配方6支试管中菌丝的生长情况,重复3次取其平均值。1.4.4统计满管天数满管天数是菌种接种到斜面培养基上,到菌丝布满斜面所需要的时间。观察并记录每种配方6支试管的满管时间,重复3次取其平均值。1.4.5观察菌种初萌发天数从菌种接种到培养基上开始观察,到接种块周围长出白色绒毛状菌丝体,这段时间为菌种初萌发时间。从接种开始,每24h观察并记录每种配方6支试管中菌种的萌

8、发情况,重复3次取其平均值。1.4.6观察菌丝长势菌丝长势是评价菌丝生长情况的重要指标。以菌丝的洁白程度、生长健壮程度、菌丝浓密程度、菌台厚度为指标,观察并记录每种配方6支试管中菌丝的长势。观察结果用很强、强、较强、弱4个等级表示。