外源性胰岛素对于胰岛素一相分泌的影响论文

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1、外源性胰岛素对于胰岛素一相分泌的影响论文【摘要】目的：探讨外源性胰岛素对离体大鼠胰岛第一时相胰岛素分泌的影响.方法：雄性SD大鼠胰腺采用Ⅴ型胶原酶经胰管灌注消化分离得到胰岛，用100μU/mL外源性胰岛素分别孵育0，60，120和240min（n=8）后，给予葡萄糖刺激，分别测定0，3，5.freelin胰岛素分泌量.结果：不同时间胰岛素预处理后，各组在葡萄糖刺激时均产生胰岛素第一时相分泌（P0.05），但随着胰岛素孵育时间的延长，胰岛素第一时相分泌峰值降低（P0.01）.结论：100μU/mL外源性胰岛素损害胰岛素第一时相分泌，且孵育时间越长，抑制程度越明显.【关键词】胰岛；细胞，培养

2、的；大鼠；胰岛素；时间反应曲线正常人的β细胞受到葡萄糖负荷刺激时呈双相式胰岛素分泌.第一时相胰岛素分泌表现在β细胞受到葡萄糖刺激后lmin开始，3～5min时达峰值，持续约10min.第一时相胰岛素分泌虽然短暂，但在调节血糖水平中具有重要的生理意义.葡萄糖诱导的胰岛素第一时相分泌受损是胰岛β细胞功能障碍的最早标志［1］，并预示着2型糖尿病的发生.目前外源性胰岛素对胰岛β细胞胰岛素分泌的作用尚无定论，有关对胰岛素第一时相分泌的影响的研究报道也较少.本研究通过观察离体胰岛在外源性胰岛素预处理后对葡萄糖刺激的第一时相分泌的变化，为进一步探讨外源性胰岛素对于胰岛β细胞胰岛素第一时相分泌的影响提供

3、依据.1材料和方法1.1材料雄性SD大鼠35只，体质量250～300g，购于第四军医大学试验动物中心.胶原酶V，Histopaque1077，双硫腙购于美国Sigma公司；胰岛素放免试剂盒购于北京北免东雅公司；RPMI1640，小牛血清购于Gibco公司；其他试剂均为国产分析纯.胶原酶Ⅴ溶液含NaCl124mmol/L，KCl4.7mmol/L，CaCl27.5mmol/L，MgSO4·7H2O1.2mmol/L，KH2PO41.2mmol/L，NaHCO32.4mmol/L，葡萄糖3mmol/L，HEPES10mmol/L，V型胶原酶0.60g/L（pH7.8）.1.2方法1.2.

4、1胰岛的分离及纯化固定大鼠后备皮，200g/L乌拉坦7mL/kg腹腔注射麻醉.剖腹充分暴露胰腺,于无菌条件下胆总管内插入4.5号头皮针，逆行注入预冷的胶原酶Ⅴ溶液8～10mL，使胰腺膨胀，迅速摘取整个胰腺，38℃水浴中静止消化10min.振荡15s使其呈细砂状，充分分散胰腺组织，再加入4℃小牛血清10mL与4℃Hanks液30mL终止消化.40目筛网过滤，除去未完全消化的组织，之后1000r/min离心2min，弃上清液，加入Hanks液清洗组织，重复以上三个步骤3～5次，直至离心后上清中无杂物.完全弃去上清，加入Histopaque1077约5mL，充分混匀，移入15mL离心管，然后

5、小心加入Hanks液约5mL，形成一个层面.逐渐加速至2000r/min离心20min.在Hanks液与Histopaque1077形成的层面上收集胰岛.用RPMI1640洗2遍后1000r/min离心2min即得到纯化后的胰岛［2］.1.2.2胰岛的鉴定胰岛用双硫腙溶液鉴定［3］.双硫腙溶液配制如下：10mg双硫腙溶于3mL无水乙醇中，加入3滴1mmol/L氨水溶液，形成深红色母液，用Hanks液1∶10稀释,然后加入到收集纯化胰岛中，记数红染细胞团.1.2.3胰岛素胰岛孵育及胰岛素分泌功能测定将分离纯化后的胰岛放入预先加有RPIM1640培养液的24孔板，50个胰岛/孔，加入外源

6、性胰岛素使其终浓度达100μU/mL孵育胰岛，分别孵育0，60，120和240min，（设0min为对照组）然后用Hanks液（含3mmol/L葡萄糖）洗涤2遍中止孵育.每孔加入Hanks液定容1mL，给予终浓度为16.7mmol/L葡萄糖刺激（240min组再给予终浓度为16.7mmol/L葡萄糖加10mmol/L精氨酸刺激），分别在0，3，5，10和30min吸取上清100μL作为待检样品，每个孵育组各重复8次，用放射免疫法测定胰岛素分泌情况.统计学处理：计量资料用x±s表示，组间比较使用SPSS11.0软件进行方差分析及LSDt检验.2结果2.1胰岛的形态及活性大鼠胰腺经胶原酶消

7、化及纯化后，获得分散较好、纯度较高的胰岛，呈圆形或椭圆形，胰岛结构完整，界限清楚，镜下为不透光实体，双硫腙染色呈深红色（图1），表明为含有β细胞的胰岛细胞团，每只大鼠胰腺平均获得直径在100~300μm之间的胰岛约为（337.80±21.36)个.2.2时间反应曲线研究结果显示：虽然各组均产生第一时相胰岛素分泌（P0.05），但随着预处理时间的延长，胰岛素第一时相分泌峰值减低（P0.01,表1），胰岛素孵育60min组葡萄糖刺激后5