夜香树提取物对小鼠白血病l1210细胞生长的抑制作用

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1、夜香树提取物对小鼠白血病L1210细胞生长的抑制作用罗发军钟振国赵华平赵世元【摘要】　　目的探讨夜香树不同提取物对小鼠白血病细胞株L1210细胞的增殖抑制作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法、平板集落法和Hoechst33258荧光染色法观察夜香树提取物对L1210细胞的生长抑制和凋亡的影响。结果夜香树提取物中正丁醇提取物和多糖提取物对L1210细胞有浓度依赖性的细胞毒性作用，在终浓度为62.5μg·ml-1范围，其正丁醇提取物和多糖提取物对L1210细胞的抑制率大于90%，IC50均小于10μg·ml-1，夜香树正丁醇和多糖提取物能抑制L

2、1210细胞集落形成，并可诱导L1210细胞发生凋亡。结论夜香树提取物对小鼠白血病细胞株L1210细胞的增殖抑制可能通过诱导L1210细胞发生凋亡而发挥作用。【关键词】夜香树提取物；小鼠白血病细胞；细胞增殖；集落形成　　Abstract：ObjectiveToevaluatetheinhibitoryeffectofdifferentextractsfromCestrumnocturnumLinn..()onmouseleukcmicL1210cellsandexploreitsmechanism.MethodsTheMTTassay,colonyfor

3、mingexperimentandHoechst33258fluorescencemeasurementonleukcmicL1210cells.ResultsThen-bultyalcoholpartandpolysaccharidepartextractedfromhaddose-dependenteffectsofcytotoxicity.I1640培养液进行培养，在含5%CO2的37℃温箱中培养，每3d传代1次。　　1.4MTT比色法〔3〕检测提取物对小鼠白血病L1210细胞增殖的影响取对数生长期的L1210细胞用含10%FBS的RPMI1640

4、培养液配成1×104·ml-1，接种在96孔培养板中，每孔200μl，每组设4个平行孔。置37℃，10%CO2培养箱中培养24h后,离心弃上清，实验组分别加入最终浓度为62.5，31.25，15.62，7.81，3.90μg·ml-1的提取物的培养液，正丁醇部位以及多糖部位的对照组则加入等体积溶剂的培养液，而石油醚部和醋酸乙酯部另设DMSO空白对照，加入等体积含DMSO的培养液；置37℃，10%CO2培养箱培养3d后弃去上清液，加入200μl/孔新鲜配制的含0.2mg·ml-1MTT的无血清培养液，37℃继续培养4h，弃去上清液，加入200μl/孔DMS

5、O，振荡混匀后，在酶标仪上以波长为550nm，参比波长为450nm测定OD值，测定时减去空白对照。实验重复4次。按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率。　　肿瘤细胞生长抑制率%=(1-实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100%。　　1.5集落形成实验取对数生长期的L1210细胞，用培养液配成每1000/ml的细胞悬液，实验组分别加入不同浓度的提取物(62.5，31.25，15.62，7.81μg·ml-1和3.90μg·ml-1)，对照组加入等体积的溶剂。取已融化的5%琼脂液1份，加入到9份37℃含10%胎牛血清的培养液中，加入到平皿，每个1ml,置室

6、温凝固。取预温细胞按每9.4ml加5%琼脂0.6ml混匀，加到已铺底层琼脂平皿中，每个1ml。置10%CO2，37℃条件下培养7d。在倒置显微镜下计数含50个细胞以上的集落数，计算集落形成抑制率：集落形成抑制率（%）=(1-给药组集落数/对照组集落数)×100%。　　1.6Hoechst33258染色法将L1210细胞接种于10%胎牛血清的培养基中，加96孔培养板中，每孔200μl。实验组分别加入不同浓度的提取物，对照组加入等体积溶剂。置10%CO2，37℃培养72h后，每孔取100μl细胞悬液，加2mmol·L-1Hoechst332581μl，37℃

7、染色15min，取40μl滴到干净的玻片上，加盖玻片，在荧光显微镜下观察(40×)，随机计数300个细胞，计算细胞凋亡率。实验重复3次。　　1.7统计学处理实验数据用±s，数据统计分析采用SPSS10.0统计软件进行统计学处理，组间比较用t检验。　　2结果　　2.1提取物对小鼠白血病L1210细胞的毒性作用将浓度不同的提取物作用于体外培养的小鼠白血病L1210细胞72h。结果见表1。　　表1不同提取物用MTT法对小鼠白血病L1210细胞的抑制作用（略）　　*P＜0.05；**P＜0.01vsparedl-1，正丁醇部位、多糖部位对L1210细胞有很强的抑

8、制率作用，IC50分别为6.97μg·ml-1，5.85μg·ml-1；阳性对照