基于超顺磁性纳米微球的cTnI定量免疫层析检测技术的研究硕士学位论文

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1、上海交通大学硕士学位论文基于超顺磁性纳米微球的心肌肌钙蛋白Ⅰ定量免疫层析检测技术的研究姓名：徐全福申请学位级别：硕士专业：心血管内科指导教师：李京波徐宏20090501上海交通大学硕士毕业论文基于超顺磁性纳米微球的心肌肌钙蛋白I定量免疫层析检测技术的研究摘要心肌肌钙蛋白I(cTnI)是组成心肌肌钙蛋白复合物的三个亚基之一，具有高度的心肌特异性，在心肌损伤时快速释放入血，被认为是诊断心肌梗死的首选心脏标志物。早期、方便、快捷测定人血液中的cTnI有利于尽早对急性冠状动脉综合征患者进行危险分层，并诊断急性心肌梗死，以便及时对患者进行适当

2、干预，改善预后。目前cTnI的临床检测主要依靠中心实验室，需要大型仪器和专业操作人员，样本周转时间(TAT)较长，不利于临床快速诊断、危险分层和及时制定治疗决策，这已经不能满足快速诊断心肌梗死的需要。而即时检测技术(POCT)的产生，由于其小型化的仪器、简化的操作和结果报告即时化，使TAT极大缩短，能够在更短的时间内报告检测结果，使快速临床决策成为可能。近几年，随着POCT技术的迅速发展，市场上已经出现了基于多种原理的cTnI即时检测技术，其中最多见的是采用固相免疫层析技术，但往往只能定性或半定量，定量检测的灵敏度和一致性也较低。基

3、于以上研究背景和现状，本论文提出了一种新型的基于超顺磁性纳米微球(SPMNB)的快速定量检测cTnI的方法，其基本原理是：利用超顺磁性纳米微球作为标记物，由高灵敏度磁性检测仪测V上海交通大学硕士毕业论文量结合在cTnI-抗体免疫复合物上超顺磁性纳米微球所产生的局部磁场效应，从而得出所测cTnI的定量结果，实现对心肌肌钙蛋白I简单、方便、快速的定量检测。本论文通过EDC/NHS法制备得到免疫磁性纳米微球，其粒径为160nm，PDI为0.040，SPMNB表面抗体偶联量为42.03µg/2mgSPMNB。然后利用上述免疫磁性纳米微球构建

4、磁性免疫层析试纸条，并针对可能影响其检测表现（结合垫的释放、假阳性的消除、灵敏度的提高）的各种因素，对试纸条的各个组成部分2进行条件优化，确定样品垫大小为0.5×2.5cm，样品垫处理液为0.02MBSbuffer、0.5%(w/v)NaCl、0.5%(w/v)BSA和2%(w/v)Triton2X-100；结合垫大小为0.5×0.5cm，处理液为0.8mg/mL免疫磁性纳米微球、0.02MBSTbuffer、10%(w/v)蔗糖和2%(w/v)海藻糖，NC膜T线单克隆抗体(mAb2)的浓度为2mg/mL，检测样品量为100µL。在

5、磁性免疫层析试纸条检测系统优化完成后，构建cTnI磁性免疫层析试纸条，检测标准cTnI样品，并与传统两步双抗体夹心ELISA法作对比，结果显示磁性免疫层析试纸条的检测灵敏度为0.01ng/mL，2cTnI浓度与磁信号线性关系良好(R=0.99224)，检测时间小于15分钟，检测范围宽，达5个数量级，各项参数均优于传统ELISA法。另外，磁信号的长期稳定性评价研究表明磁性免疫层析试纸条检测结果的磁信号在140天内保持相对稳定，有利于归档和信息回顾调查。由此可见，本论文所研究构建的cTnI磁性免疫层析试纸条初步实现了对cTnI的方便、快

6、速的定量检测，对于急性冠脉综合征的早VI上海交通大学硕士毕业论文期诊断和分型具有一定的应用前景。关键词：心肌肌钙蛋白I，心肌梗死，超顺磁性纳米微球，免疫层析，即时检测VII上海交通大学硕士毕业论文DEVELOPMENTOFLATERALFLOWIMMUNOASSAYSYSTEMBASEDONSUPERMAGNETICNANOBEADSASLABELSFORRAPIDQUANTITATIVEDETECTIONOFCARDIACTROPONINIABSTRACTSuccessfulmanagementofacutemyocardiali

7、nfarction(AMI)requiresearlyandrapiddiagnosisofthisdisease.CardiactroponinI(cTnI),oneofthecardiacmuscleregulatoryproteinslocatedontheactinfilamentofnormalcardiacmyocytes,canbereleasedintobloodquicklyaftertheonsetofacutemyocardialinfarction(AMI).Duetoitshighergreaterspec

8、ificityfordetectionofAMIoverothercardiacmarkers,suchasCardiactroponinT(cTnT)、CK-MBandmyoglobin,cTnIhasbeenwidelyuseda