与妇科恶性肿瘤的基因治疗

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1、与妇科恶性肿瘤的基因治疗　　摘要:P53基因异常与肿瘤发生密切相关。将外源性野生型p53导入妇科恶性肿瘤细胞，在体外及动物实验中均出现了抑制肿瘤细胞生长及使肿瘤细胞出现凋亡的现象，故认为p53基因治疗妇科肿瘤很有前途。　　基因治疗是80年代发展起来的人类医学分子遗传学中的新领域。发展非常迅速，起初仅用于单基因遗传病的治疗性研究方面，随着对恶性肿瘤的研究在分子水平上取得突破性进展，恶性肿瘤的基因治疗已成为当前研究的热点。p53基因是至今发现与人类肿瘤相关性最高的基因，约50%的人类恶性肿瘤中都存在p53基因的异常。因此在基因治疗的研究中p5

2、3基因的地位十分突出。　　1．p53基因与肿瘤的关系　　p53基因位于人的17号染色体短臂1区3带1亚带（17P13.1），全长约20kb。由11个外显子和10个内含子组p53mRNA长2.8kb，表达产物p53蛋白是一种磷酸化核蛋白，由393个氨基酸残基组成，分子量为53KD。p53蛋白在体内以四聚体形式存在，半衰期为20分钟～30分钟，氨基端有一个酸性区域，羧基端含有3个核定位信号，与p53在细胞核内的积聚有关。野生型p53是细胞生长的“临控器”，它的主要功能为：①调节细胞生长周期，使细胞停滞在g1期；②参与dNA损伤修复；③参与诱导

3、细胞凋亡。　　野生型p53调节细胞周期的作用主要通过两个途径实现。一个途径为野生型p53与细胞核内特异的dNA部位结合，结合后通过氨基端的酸性激活区激活邻近基因的启动子，促进基因的表达。受其促进的基因多为细胞增殖的抑制基因，从而抑制细胞增殖。最近发现p53能启动ujoo等[10]于1996年用ad-CMV-p53转染人卵巢癌sKOV-3细胞株（该细胞p53基因缺失）。结果抑制了该细胞的克隆形成能力。将已转染p53的sKOV-3细胞注入祼鼠体内，提高了祼鼠生存率50%。p53基因治疗的荷瘤祼鼠中有4支长期生存者，生存期为66天，120天、1

4、66天和423天。充分显示了p53基因治疗的有效性。nielsenLL[11]也对p53阴性的sKOV-3细胞进行了p53基因转染，获得了同样的治疗效果。他同时还发现p53的基因治疗可与卵巢癌的紫杉醇类化疗药物产生协同作用[12]。　　宫颈癌：hamada等[13]于1996年用ad-CMV-p53转染八个人宫颈癌细胞株。其中六个细胞株hPV（+），p53基因正常，但细胞内未检测到p53蛋白，认为是hPV的e6蛋白使p53降解；二个细胞株hPV（-），出现p53基因突变。转染后6小时在细胞核内出现明显的p53蛋白染色，第三天达高峰。转染后

5、15天p53蛋白的表达仍高于水转染细胞。向祼鼠体内注入p53基因，p53蛋白表达持续15天。说明外源性p53基因在体内外可以有效表达。p53转染的宫颈癌细胞的生长受到明显抑制。外源性p53使宫颈癌细胞的致瘤性明显下降。他们向宫颈癌祼鼠模型的肿瘤中单次及多次注射外源性p53，发现多次注射抑制啃瘤生长作用更强，在六次注射组中有二支鼠肿瘤完全消失。他们还对p53抑制肿瘤细胞生长的机理作了探讨，发现在p53感染后24小时48小时，部分肿瘤细胞出现细胞凋亡的前奏变化，细胞变圆，外膜有小泡，感染后36小时，出现凋亡核的的dNA片断。认为p53抑制肿瘤

6、的作用是由于诱发肿瘤细胞凋亡。　　子宫内膜癌：尚示见将外源性p53导入内膜癌细胞的报道。　　3．基因转移方法　　基因转移方法有物理、化学及生物学方法。以病毒为载体的生物方法应用最广，可用于体外及体内实验。以往多用逆转录病毒。但逆转录病毒只能感染分裂复制的细胞，对高分化而不分裂的细胞不能感染，且滴度较低。更主要的是逆转录病毒能整合入基因组中，有引起插入性突变的可能。目前认为腺病毒做载体更具优越性。腺病毒是一种dNA双链无包膜病毒，基因组dNA约36KD，可编码14种蛋白质。该病毒有以下优点：①对人类安全，无致畸、致病及致癌性；②对分裂细胞及

7、颈癌细胞株的转染效率达到90%～100%；③腺病毒感染细胞时dNA不整合到宿主细胞染色体中。因而无潜在激活原癌基因或使抑癌基因失活的危险；④腺病毒容易制备、纯化和浓缩，可达到较高滴度；⑤腺病毒载体可插入7.5kb的外原基因，容量较大，所以目前国外多用复制缺陷的腺病毒为载体介导p53基因转移。　　4．目前存在的问题　　p53基因治疗的研究虽然取得了一定的成绩，也存在不少问题。最突出的问题为抗体的产生。病毒载体均可引起抗体产生。腺病毒能引发强烈的免疫反应，在第一次感染后两周内恒河猴血浆中的抗腺病毒体滴度升高[14]。由于抗体的产生，腺病毒为载

8、体的基因导入难以长期应用。其次肿瘤是一种多基因异常的疾病，仅纠正p53异常能否达到治愈的目的尚需研究。另外目前基因导入后，都领先某些外源的启动子而表达，无法进行调控。　　总之，用外源性p53基