热刺激对原代培养神经元部分生物学特性的影响论文

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1、热刺激对原代培养神经元部分生物学特性的影响论文【关键词】神经元【Abstract】AIM:Tostudytheeffectsofhyperthemiaonthemorphologyandapoptosisofneurons,asperature.METHODS:Themorphologyofneuronsicroscope,theirapoptosisethodandtheresultsageanalysissystem.Thevitalityofneuronsperatureandthehighestaveragegrayperature.CONCLUSIO

2、N:Hyperthemiainducestheapoptosisofneuronsand39℃isthetemperaturetoinducethepeakpointofapoptosis.Thevitalityofneuronsdecreasesperature.【Keyia;neuron;Klenoethod;apoptosis【摘要】目的：研究热刺激对神经元形态及凋亡的影响,观察不同温度下神经元活力的变化.方法：利用倒置相差显微镜观察高温后神经元的形态学改变.应用KlenogL-1胰酶消化,1000rmin-1,离心1min,终止消化,以完全培养基(10

3、mLL-1胎牛血清,青、链霉素1×105UL-1)稀释至7×108L-1密度并接种于经多聚赖氨酸处理过，加有玻片的培养皿及96孔板中,.freelLL-1CO2的培养箱,37.4℃培养48h后,加入阿糖胞苷(10mgL-1)以抑制非神经元的继续生长,每隔2d半量换液,培养第7日时，经βtubulin免疫荧光染色显示80%以上细胞为阳性，可认为是纯神经元培养，进行后续实验［1］.1.2.2热应激损伤模型的建立培养好的神经元移入经乙醇消毒的全自动水浴加热器，处理30min.1.2.3实验分组将培养好的神经元随机分为高温组和对照组①高温组：按高温模型分别于38,39

4、,40,41和42℃温度处理30min.②对照组：37.4℃正常培养的神经元.上述实验及对照组均随机选取3个细胞爬片.1.2.4倒置相差显微镜观察在倒置显微镜下观察处理组及对照组皮质神经元的形态.1.2.5DNA聚合酶ⅠKlenoLL-1H2O2清除内源性酶，KlenomolL-1盐酸的异丙醇溶液，振荡5min.酶标仪上测定A490nm.1.2.7图像分析用LeicaQ570c真彩色图像分析仪对Klenoperaturepoint(略)3讨论高温环境下，特别是机体对热适应反应尚未建立时，常导致热射病等疾病的发生，表现为中枢机能紊乱、水盐代谢失调、外周循环衰竭等

5、临床表现，但其详细机制仍不清楚.本实验我们采用体外原代培养的皮质神经元，能够在体外严格控制实验条件下观察干预因素对神经元的影响.国内外学者在研究中发现，高温可诱导多种细胞凋亡［2,3］.目前，凋亡研究中常用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL法）检测DNA损伤，该方法主要应用于DNA双链断裂的检测［4］.1997年Tagaya等［5］发现应用DNA聚合酶ⅠKlenoaGonda等［8］对PC3前列腺癌细胞使用不同高温处理后，发现高温不仅可以诱发其凋亡，还可以导致其坏死，引起反应性氧自由基增加和超氧化物歧化酶的激活，这说明从凋亡到坏死的过程和

6、高温或高温的持续时间有关.我们的实验也发现高温后的神经元凋亡有一峰值，这可能与高温引起神经元坏死，细胞总数下降有关.Takasu等［2］的研究结果表明，热诱导HL60细胞凋亡过程中，凋亡率的升高伴发G1期细胞及S期细胞数量减少.Khan等［9］人发现有丝分裂期间的神经元比有丝分裂后的神经元对高温诱导的凋亡更加敏感.有丝分裂期、G1期及S期细胞代谢旺盛、耗氧量高.实验中我们发现，高温诱发神经元凋亡的温度较文献报道诱发肿瘤细胞低［2］，这可能与神经元需氧大，代谢旺盛，对生长环境要求严格有关.MTT结果发现随着温度的升高，平均吸光度下降，37.4℃为0.48±0.0

7、3，42℃为0.21±0.02.从本实验结果可以看到高温处理后神经元的生物学特性有很大的变化，凋亡细胞增加，细胞活性随温度升高不断降低.这种变化与温度的影响密切相关，证明了高温对神经元生物学特性的影响.【