鲍曼不动杆菌adc型ampc β内酰胺酶基因研究

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1、鲍曼不动杆菌ADC型AmpCβ内酰胺酶基因研究作者：黄支密储秋菊糜祖煌单浩杨海燕仵蕾秦玲【摘要】目的了解浙江湖州解放军第98医院自临床分离的鲍曼不动杆菌(Aciobacterbaumannii)中ADC型AmpCβ内酰胺酶基因(blaADC)存在状况。方法收集2000年7月～2002年12月所分离到的60株鲍曼不动杆菌，采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析blaADC基因。结果60株中有59株blaADC基因呈阳性(98.3%)，序列分析表明4号菌株(原始编号HZB3944)blaADC基因为一新亚型，其核酸序列已登录Ge

2、nBank(注册号EF569589)。结论鲍曼不动杆菌中blaADC基因阳性率很高，产ADC型AmpCβ内酰胺酶是本组菌株对β内酰胺类抗生素耐药的重要原因之一。【关键词】鲍曼不动杆菌；ADC型；AmpCβ内酰胺酶ABSTRACTObjectiveToinvestigatetheADCtypeAmpCbetalactamasegene(blaADC)inAciobacterbaumanniiisolatedfromthe98thHospitalofPLA,HuzhouDistrict,Zhejiangprovince,C

3、hina.MethodsSixtystrainsofAciobacterbaumanniihospitalizedpatientsbeterasechainreaction(PCR)andverificatedbyDNAsequencing.ResultsThepositiverateofblaADCgeneberinedtobeanovelsubtype(GenBankACCESSION:EF569589).ConclusionThereannii,andproducingADCtypeAmpCbetalactamasep

4、ortantcauseofresistanttoβlactamsantibiotic.KEYerieux公司API20NE重新鉴定。标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603和铜绿假单胞菌ATCC27853。采用法国BioMerieux公司ATB药敏试验条板微量肉汤法测定20种抗菌药物的敏感性，分别为阿莫西林(AMPC)、阿莫西林/克拉维酸(AMPC/CA)、哌拉西林(PIPC)、哌拉西林/三唑巴坦(PIPC/TB)、替卡西林(TIPC)、替卡西林/克拉维酸(TIPC/CA)、头孢噻吩(CET

5、)、头孢噻肟(CTX)、头孢他啶(CAZ)、头孢吡肟(CPE)、氨曲南(AZ)、亚胺培南(IMP)、美罗培南(MRP)、妥布霉素(TOB)、阿米卡星(AMK)、庆大霉素(GM)、奈替霉素(NTL)、复方磺胺甲口恶唑(SMZ/TMP)、环丙沙星(CPLX)、多黏菌素(COL)。60株鲍曼不动杆菌对COL全部敏感；对碳青霉烯类抗生素IMP、MRP的敏感率高达98.3%；对第三、四代头孢菌素的耐药率达58.3%～80%；对CPLX耐药率达80%，对SMZ/TMP及4种氨基糖苷类抗生素的耐药率达86.7%［11］。1.2ESBLs和A

6、mpC酶检测采用三维试验法，底物为CTX，委托浙江大学医学院附属第一医院传染科完成［12］。1.3基因检测全部采用PCR法。采用蛋白酶K消化法制备DNA扩增模板，共检测11种(群)BLA基因，其中本次检测的3种基因blaADC、blaGES和blaCARB的引物序列及产物长度见表1，先前已检测的8种基因blaTEM、blaSHV、blaOXA10群、blaCTXM1群、blaCTXM2群、blaCTXM9群、blaPER1和blaVEB的引物序列及产物长度见质粒介导的blaTEM基因在鲍曼不动杆菌中普遍存在［1

7、，5，10，11，16］。在本文的相关研究中，我们曾于2003年报道在国际上首次发现携带blaSHV12型ESBL基因鲍曼不动杆菌［11］，证实了在世界范围内在肠杆菌科细菌(如肺炎克雷伯菌)中广泛流行的质粒介导的blaSHV12型ESBL基因向肠杆菌科以外鲍曼不动杆菌转移。携带blaPER1型ESBL基因鲍曼不动杆菌曾在土尔其流行［17］，在我国的上海、北京、河北石家庄［10］、浙江湖州［6］等地均有发现，但本组菌株中未发现，可能与菌株来源差异(如时间、地理位置不同)有关。2000年Bou等［22］首次报道不动杆菌耐药株

8、产生了染色体AmpC酶，对AmpC酶基因克隆并测序了一个1152bp的开放读码框架(ORF)。这个ORF以TAA结尾，编码由383个氨基酸组成的蛋白。该酶含有一般AmpC酶激活位点的SXSK序列以及C类酶的典型序列YXN、KTG，与阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌的AmpC酶基因有一