decorin因子对人胃癌细胞及其表达的mg7蛋白的作用

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1、Decorin因子对人胃癌细胞及其表达的MG7蛋白的作用【摘要】目的研究decorin因子对人胃癌细胞BGC-823的抑制作用，以及对胃癌细胞特异表达的MG7蛋白的影响。方法肿瘤细胞用含不同剂量（0、1、3、6μl）decorin的细胞培养液培养，应用MTT测定法来测定生长抑制率，电镜技术来观察细胞凋亡情况，免疫组化技术来检测细胞内MG7蛋白含量。结果decorin对胃癌细胞具有生长抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性（方差分析，P＜0.05）。电镜下可观察到凋亡细胞，免疫组化发现细胞内MG7的含量在处理前后有明显变化。结论decorin因子抑制人类胃癌细胞生长，诱导其产生凋亡，有望作为

2、一种新的凋亡诱导剂用于胃癌的治疗，并且该因子的作用与细胞内MG7含量有密切关系。　　【关键词】decorin；胃癌细胞；MG7蛋白　　InfluencesofdecorinontheBGC-823cellandMG7protein　　【Abstract】ObjectiveToexp1oretheeffectofdecorinontheBGC-823cellandMG7protein.MethodsThegroecourseissionelectronmicroscopy(TEM)，andquantityofMG7icalstaining.ResultsTheinhibitionofp

3、roliferationonthecellsissionelectronmicroscope.ThedifferentquantitiesofMG7proteinincellsicalstaining.ConclusionDecorininhibitsproliferation，inducesapoptosisofhumangastriccancercells，andtheeffectshavecloserelationtothequantitiesofMG7proteinincells.　　【Keyl培养瓶中进行培养，2～3d传代，用0.1%的PBS洗2遍，0.25%的胰酶消化，分

4、装。　　1．2．2细胞干预将对数生长期的BGC-823细胞计数后，调整细胞密度为1×104/L，接种到96孔培养板，每孔200μl，每组5孔，细胞贴壁后每孔分别加入浓度为15μg/ml的decorin(1μl、3μl、6μl)继续培养24h、48h、72h，以培养液为对照组。MTT（5G/L）20μl,37℃再培养4h，弃上清加DMSO200μl,震荡10min，于酶标仪490nm波长测定吸光度，记录数据。实验重复3次。肿瘤细胞的抑制率(%)=(1-实验组A值/阴性对照组A值)×100%。　　1．2．3形态学观察培养状态下，直接用倒置显微镜观察细胞的生长状况，形态改变及凋亡小体形成，

5、细胞爬片培养经decorin作用后，0.1%PBS洗涤，95%乙醇固定，常规HE染色，观察细胞形态与核染色质的变化。　　1．2．4MG7的测定细胞培养同上，将生长旺盛的胃癌细胞用胰酶消化，制成密度为1×105/L的悬液，接种于24孔培养板中，孔内预置盖玻片，细胞贴壁后，分别加入5μl、15μl、30μldecorin，每孔设3复孔，以加常规培养液的孔做对照，分别培养24h、48h、72h，吸去上清液，95%乙醇固定15～20min，待免疫组化染色。收集上清液用于MG7的测定。　　1．3统计学处理用方差分析，q检验经SPSS统计分析软件进行数据的统计学处理，显著性取P＜0．05。　　2

6、结果　　2.1细胞增生抑制率decorin因子能有效抑制体外培养的BGC-823细胞生长，其抑制率随时间延长和浓度升高而升高见表1，呈时间效应和剂量效应关系。　　表1decorin因子对BGC-823细胞的生长抑制率剂量（略）　　2.2细胞HE染色形态观察光镜下未处理组细胞形态呈多角形、圆形、细胞体积大，边缘不清，多形性明显，胞质较丰富饱满而透亮;核大小不一，可见核分裂、双核及核仁;细胞生长紧密甚至呈堆叠生长(图1A)，decorin处理组细胞形态变化明显，由多角形为主变为形态一致、以梭形为主，胞质丰富透亮，可见部分圆形漂浮的细胞，其胞质内见许多颗粒;大部分细胞体积小，贴壁紧密，分散

7、存在，细胞境界清楚;细胞核明显变小(图1B)。　　2．3细胞化学染色观察MG7阳性的细胞主要为细胞质和核膜着色，呈棕黄色细颗粒状，少部分细胞有细胞核和细胞质同时着色。处理前的肿瘤细胞，MG7的表达水平较高(图2A)，而处理后，可以发现，MG7表达水平明显下降，并出现细胞形态的改变(图2B)。　　3讨论　　凋亡异常在肿瘤发生发展中具有重要作用，逃避凋亡机制的调控在肿瘤细胞对常规化疗药物耐药中起关键作用。随着凋亡研究的深入，人们致力于开发新的药物以选择性诱导肿