mrl-lpr狼疮小鼠cd4+cd25+调节性t细胞和相关基因的研究

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1、MRL/lpr狼疮小鼠CD4+CD25+调节性T细胞和相关基因的研究作者：卢雪红田庚杨巍李一顾华【摘要】　　目的通过研究MRL/lpr系统性红斑狼疮（SLE）小鼠（模型组）胸腺、脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞（Tr）数量和相关基因的变化，探讨Tr在SLE发病中的作用。方法采用间接免疫荧光法检测模型组和对照组血清中抗核抗体水平，流式细胞术检测胸腺、脾脏中Tr数量，RTPCR检测Tr功能基因表达水平。结果抗核抗体模型组均为阳性，而对照组均为阴性；胸腺、脾脏中Tr数量模型组与对照组无明显差别；Foxp3的表达水平在模型组胸腺中与对照组无明显差别，而在模型组脾脏中却低于

2、对照组；CTLA4的表达水平在模型组胸腺和脾脏均高于对照组。结论Tr数量的变化在MRL/lpr小鼠的发病中不起关键作用，而Tr功能的变化，尤其在外周的功能缺陷可能是其发病的原因之一，至于Tr的抑制功能是否真正发生变化，还有待于进一步通过体外抑制功能的检测来确定。【关键词】MRL/lpr小鼠；系统性红斑狼疮；CD4+CD25+调节性T细胞；小鼠【Abstract】ObjectiveToinvestigateCD4+CD25+regulatoryTcellsandtargetgenesinthymusandspleenofMRL/lprmice.MethodsSeruma

3、ntinuclearantibodymunofluorescence.CD4+CD25+Trinedbyfloetryanditstargetgenesodelgroupbutnegativeincontrolgroup.Thereodelandcontrolgroups.Foxp3levelsofmodelgroupusbutloodelgrouphadhigherthanthoseofcontrolgroupbothinthymusandinspleen.ConclusionsMRL/lprmicedonotoccurasaresultofreducedlevel

4、ofCD4+CD25+Tr,butfunctiondefectofCD4+CD25+Trmayberesponsibleforitsoccurrence.ButthesuppressiveeffectofCD4+CD25+Trisstillneedtobeconfirmedbyvitrotest.【Keyiclupuserythematosus;CD4+CD25+regulatoryTcells;Mouse　　CD4+CD25+调节性T细胞(regulatoryTcell，Tr)是健康个体T细胞群的重要成员，通过与靶细胞的相互接触、下调靶细胞上白介素(IL)2Rα的表

5、达，以及抑制抗原提呈细胞(APC)提呈抗原而抑制免疫应答。除CD25外，这群细胞还表达多种分子，与其功能的发挥密切相关，如CTLA4，GITR，Foxp3等，尤其是Foxp3可特异性表达在Tr细胞上。很多研究发现，Tr数量减少可导致器官特异性自身免疫性疾病的发生〔1〕，但在器官非特异性自身免疫病〔如系统性红斑狼疮（SLE）〕中的作用报道不多，因此探讨Tr在SLE中数量和功能的变化将为这一类疾病的发病机制和寻找新的治疗靶点奠定基础。　　MRL/lpr小鼠是常用的SLE动物模型之一，其症状与人类SLE相似，含有与细胞自发性程序性死亡有关的Fas基因隐性突变〔2〕，出现淋巴

6、细胞增生基因，导致T细胞增生，全身淋巴结肿大，加速了自身免疫反应。Hori等〔3〕的研究表明Foxp3基因敲除的小鼠会出现明显的淋巴增生而导致自身免疫病的发生，那么Tr数量及其功能的变化是否参与MRL/lpr小鼠的发病呢？本文选用MRL/lpr小鼠，对照组选用BALB/C小鼠，检测了胸腺、脾脏中Tr的数量和功能基因表达水平，以了解Tr在SLE发病中的作用。　　1材料与方法　　1.1材料　　7只MRL/lprSLE小鼠购自北京斯莱克动物中心，7只BALB/C小鼠由吉林大学基础医学院动物中心提供，均为雌性，10周龄,模型组体重为30～37g，对照组19～21g。FITC标记

7、山羊抗小鼠IgG为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。抗核抗体试剂盒为德国欧蒙公司产品。FITC标记的抗小鼠CD25单克隆抗体（mAb）（FITC抗CD25mAb）及PE标记的抗小鼠CD4mAb(PE抗CD4mAb)为英国B.D.公司产品。尿蛋白试纸为广州市花都高尔宝生物技术有限公司产品。荧光显微镜为日本Olympas产品。流式细胞仪（FACSCalibur）为美国BECTONDICKINSON产品。　　1.2方法　　1.2.1检测尿蛋白　　用尿蛋白试纸蘸取小鼠尿液，与标准尿液分析试纸条的颜色，并进行比较，结果以“-、+、、、”表