hplc法测定清火栀麦片中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量论文

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1、HPLC法测定清火栀麦片中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量论文.freelonsilTMC18色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）;流动相：甲醇-0.4%冰醋酸水溶液（46：64）；检测波长225nm和250nm；流速1ml/min。结果穿心莲内酯的线性范围为0.112～0.391μg（r=0.9997），平均回收率为99.8%，RSD=1.8%(n=5)；脱水穿心莲内酯的线性范围为0.221～0.773μg(r=0.9996).freelinethecontentofandrographolide、dehydroandrograph

2、olideinQinghuozhimaitabletsbyHPLC.MethodsAnexternalstandardmethodbyHPLConsilTMC18columnasfixedphaseandmethanol-0.4%HAC(46:64)asmobilephase、250nmandtheflol/min.ResultsThelinearrangeforandrographolideplepleethodissimpleandaccurate，aitablets.【Keyillion2010数据处理系统。甲醇（色谱纯），冰醋酸（

3、分析纯），水为重蒸水；清火栀麦片由江西汇仁集团提供。穿心莲内酯（0797-200105）、脱水穿心莲内酯（854-9902）对照品由中国药品生物制品检定所提供，经高效液相色谱法归一化法测定纯度为99.5%和99.0%。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱DiamonsilTM（钻石），C18，150mm×4.6mm，5μm;流动相：甲醇-0.4%冰醋酸水溶液（46：64）；流速1ml/min；柱温25℃。检测波长225nm和250nm。2.2样品制备及方法可行性考察2.2.1对照品溶液取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品适量，精密称定，甲醇溶解

4、，制成浓度为穿心莲内酯20μg/ml和脱水穿心莲内酯50μg/ml的混合对照品溶液，备用。2.2.2样品溶液制备取本品20片，除去糖衣，研细，混匀。取粉末约0.5g，精密称定，置25ml容量瓶中，加甲醇20ml，超声处理30min，放置至室温，用甲醇定容，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。2.2.3阴性样品溶液制备另取不含穿心莲药材的阴性样品*［*不含穿心莲药材的阴性样品：按清火栀麦片配方（删除穿心莲药材），采用该片剂制备工艺制得的样品］，照供试品溶液项下操作制备成阴性样品溶液。2.2.4测定方法分别取对照品溶液、供试品溶液

5、和阴性样品溶液10μl注入HPLC仪，绘制色谱图，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的理论塔板数均不小于4000。样品中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯与相近峰分离清晰完全，穿心莲内酯分离度为1.5，脱水穿心莲内酯分离度为2.0。且阴性样品在相同位置无干扰。见图1。图1对照品样品及阴性对照品的HPLC图谱2.3线性关系考察分别精密吸取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯混合对照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml，分别置10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，混匀。穿心莲内酯对照品溶液浓度分别为11.16、16.74、22.32、27.90、33.

6、48、39.06μg/ml，脱水穿心莲内酯对照品溶液浓度分别为22.08、33.12、44.16、55.20、66.24、77.28μg/ml，分别取10μl注入HPLC仪。以峰面积为纵坐标，对照品量为横坐标，绘制标准曲线，回归方程分别为：穿心莲内酯：Y=2.19×１０６X-5.84×１０４，r=0.9997；脱水穿心莲内酯：Y=1.53×１０６X-5.10×１０３，r=0.9996。线性范围：穿心莲内酯：0.112～0.391μg；脱水穿心莲内酯：0.221～0.773μg。2.4仪器精密度和样品稳定性、重现性试验在相同色谱条件下，分别

7、精密吸取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品的混合溶液10μl，注入HPLC仪，重复进样5次，测定对照品溶液峰面积积分值，结果见表1。同一供试品溶液每次取10μl，每隔1h进样，共进样5次，测定峰面积积分值，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰面积RSD分别为1.4%和0.8%，结果表明，样品在5h内稳定。见表2。表2稳定性试验测定结果同一批样品5份，精密称定，按“样品溶液制备”项下操作，制备成供试品溶液，每份样品各进样10μl，测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量，其平均穿心莲内酯含量为0.0731%，RSD=1.1%；脱水穿心莲内酯含量为0.321

8、%，RSD=0.6%。结果见表3。表3重复性试验测定结果2.5回收率试验精密称取已知含量的样品5份，分别精密加入一定量的穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品，按样品溶液制备和测定方法项下操作测定，