rphplc法测定穿心莲提取物中穿心莲内酯的含量

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1、RPHPLC法测定穿心莲提取物中穿心莲内酯的含量【摘要】目的建立穿心莲提取物中穿心莲内酯的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱：HypersilODSC18（4.0mm×250mm，5μm），流动相：乙腈体积分数0.1％磷酸水溶液（体积比25∶75），检测波长226nm，流速1.0mL/min。结果穿心莲内酯在0.5～5.0μg（r=0.9995）范围内线性关系良好，平均加样回收率为98.73％，RSD为1.32％。结论本方法简便、准确、重现性好，可作为穿心莲提取物中穿心莲内酯的含量测

2、定方法。【关键词】反相高效液相色谱法；穿心莲提取物；穿心莲内酯　　穿心莲内酯（andrographolide）又名穿心莲乙素，是爵床科植物穿心莲Andrographispaniculata（Burm.f.）Nees的有效成分之一，具有抗菌、消炎、止咳平喘、清热解毒、凉血消肿等作用，广泛用于上呼吸道、消化道的细菌感染所引起的各种疾病［1］。关于穿心莲药材及其制剂中穿心莲内酯的含量分析测定方法已有比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法等报道［2-5］。本文采用反相高效液相色谱法（RPHPLC）测定了穿心莲提

3、取物中穿心莲内酯的含量，方法简便、快速、准确，可作为穿心莲提取物中穿心莲内酯的含量测定方法。　　1仪器与试剂　　　美国安捷伦科技有限公司生产HP1100高效液相色谱仪，G1311A四元泵，G1314A紫外检测器，HP1100/Agilent化学工作站，Lambda25型紫外分光光度计（带扫描功能），德国赛多利斯BP211D型电子天平（感量0.01mg），SB2200超声波清洗器，针筒式样品过滤器，溶剂过滤器。　　　　甲醇（分析纯，0.45μm滤膜滤过）;乙腈（色谱纯）;水（重蒸水）;穿心莲提取物：桂林

4、莱茵生物制品有限公司提供;穿心莲内酯对照品：中国药品生物制品检定所提供，批号：0797—200106。　　2方法与结果　　2.1检测波长的选择　　对穿心莲对照品溶液进行最大吸收的波长扫描，记录色谱图（图1），穿心莲内酯的最大吸收波长在226nm处，故选择此波长为穿心莲内酯的检测波长。　　图1穿心莲内酯吸收光谱图（略）　　Fig.1UVspectrogramofandrographolide　　2.2色谱条件　　色谱柱为HypersilODSC18(4.0mm×250mm,5μm)，柱温为室温，流动相为

5、乙腈体积分数0.1%磷酸水溶液（体积比25∶75），流速1.0mL/min，进样量5μL，检测波长226nm。　　2.3标准曲线的制定　　精密称取穿心莲内酯对照品10mg置10mL容量瓶中，加甲醇超声溶解后定容至刻度，得质量浓度为1.0mg/mL的对照品溶液，过0.45μm滤膜。精密吸取穿心莲对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0、10.0mL分别置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。按上述色谱条件进行分析，每次进样5μL，以对照品穿心莲内酯进样量为横坐标（m），以与其相应的峰面积

6、为纵坐标（A），绘制标准曲线，得线性回归方程：A=3932.29444m-55.700008,r=0.9995。穿心莲内酯在0.5～5.0μg范围内线性关系良好。对照品HPLC图谱见图2。　　2.4供试品溶液的制备　　精密称取穿心莲提取物(批号:2002006)粉末10mg置10mL容量瓶中，加甲醇超声溶解15min，取出冷却至室温，用甲醇定容至刻度，过0.45μm滤膜，即为供试品溶液。取5μL注入高效液相色谱仪。供试品HPLC图谱见图3。　　图2穿心莲内酯对照品HPLC图谱（略）　　Fig.2HPL

7、Cchromatogramofstandardreferencematerialofandrographolide　　图3穿心莲提取物样品HPLC图谱（略）　　Fig.3HPLCchromatogramofsampleofextractiveofAndrographispaniculata（Burm.f.）Nees　　2.5精密度试验　　按上述色谱条件，取同一批号供试品溶液连续进样5次，每次5μL，分别测定峰面积，计算得峰面积RSD值为1.05％。　　2.6重现性试验　　取同一批穿心莲提取物样品分别称

8、取5份，依法测定穿心莲内酯的含量，计算得其RSD值为1.16％，表明方法具有良好的重复性。　　2.7稳定性试验　　取同一批号样品溶液分别在室温下放置2、4、6、8、10h后测定，以峰面积计算穿心莲内酯的RSD为1.15％(n=5)，试验表明样品溶液在10h内稳定。　　2.8加样回收率试验　　精密称取已知穿心莲内酯含量的穿心莲提取物(批号:2002006)粉末5份，分别准确加入穿心莲内酯0.10mg，按上述色谱条件测定，计算得平均回收率为98.73％，RS