浸润性乳腺癌组织中ecadherin和cd44v6表达及dna倍体分析

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1、浸润性乳腺癌组织中Ecadherin和CD44v6表达及DNA倍体分析马春梅蒋敏李敏刘伟朱艳芳陈永林【摘要】　　目的：探讨浸润性乳腺癌组织中Ecadherin（Ecad）和CD44v6的表达及DNA倍体，并分析其临床病理学意义.方法：应用免疫组化SP法、组织化学Feulgen染色及图像分析技术检测103例浸润性乳腺癌组织中Ecad和CD44v6蛋白的表达及DNA倍体.结果：浸润性乳腺癌Ecad阳性表达率为35.0％(36/103)，Ecad表达与组织学分级、组织浸润程度、腋窝淋巴结转移、复发、远处转移密切相关（P＜

2、0.05）.CD44v6阳性表达率为76.7％(78/103)，其表达与组织学分级、组织浸润程度、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移、复发、远处转移密切相关（P＜0.05）.Ecad阴性和CD44v6阳性表达的浸润性乳腺癌多为异倍体癌；Ecad阳性和CD44v6阴性表达的多为2倍体癌（P＜0.05）.结论：Ecad的低表达与CD44v6的高表达可能参与乳腺癌的侵袭与转移；DNA异倍体可作为对乳腺癌预后的判断指标之一.【关键词】乳腺肿瘤E钙粘着糖蛋白CD44v6免疫组织化学异倍体0引言　　浸润和远处转移是导致乳腺癌临床治疗失败的主

3、要原因.因此，阐明乳腺癌的浸润、转移机制显得尤为重要.随着对肿瘤发展分子机制的深入研究，发现黏附分子Ecadherin(Ecad)和CD44v6蛋白的表达与肿瘤浸润、转移密切相关〔1〕.恶性肿瘤的重要特征之一就是细胞无限制的生长，细胞DNA含量及分布的异常是其生长的物质基础.所以细胞DNA含量的测定对判断肿瘤性质、预后具有重要意义〔2〕.我们通过观察Ecad和CD44v6在浸润性乳腺癌的表达，以探讨二者与乳腺癌各病理、临床指标间的关系及与DNA倍体的相关性，为判断乳腺癌进展及预后提供参考指标.1材料和方法1.1材料兰州大

4、学第一医院病理科手术切除女性乳腺癌标本103例，年龄23～76（平均48.2）岁.依据者12例，＞3cm者44例；无腋窝淋巴结转移患者11例，1～3个转移患者16例，＞3个转移者29例；局部复发14例，远处转移20例.SP试剂盒、鼠抗人Ecad和CD44v6单克隆抗体均购自福州迈新生物技术公司.1.2方法1.2.1Ecad和CD44v6表达标本经40g/L甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，连续4μm薄切片，分别作HE、免疫组化染色及FeulgenDNA染色.免疫组织化学染色采用SP法，操作步骤按说明书进行.以已知阳性切片作阳性

5、对照，阴性对照用PBS代替一抗.按照BloomRichardson标准进行组织学分级；组织浸润程度按肿瘤边界清楚度进行分级；无腋窝淋巴结转移为（-）组，1～3个腋窝淋巴结转移为（+）组，＞3个为（）组；CD44v6以细胞质/膜出现棕色颗粒为阳性细胞，Ecad计细胞膜棕染为阳性细胞，根据阳性细胞百分率和染色深浅度的乘积分级：阴性（-）、阳性（+）、强阳性（）.1.2.2DNA倍体分析DNA倍体分析采用Feulgen染色，依据欧洲分析病理学会（ESACP）1995年提出的标准化方案改进，石蜡切片脱蜡、梯度乙醇入水后用1mo

6、l/L盐酸水溶液于60℃处理8min，后入Schiff液在室温下暗处反应45min，亚硫酸水溶液洗涤1min×3次，流水冲洗，常规脱水封片.采用VideoPro32图像分析系统对Feulgen染色切片的癌细胞进行DNA含量检测，每例检测100个癌细胞核积分吸光度（IA）值.同时，检测同一切片30个淋巴细胞的IA，以淋巴细胞的平均（P50）IA值作为二倍体（2C）的对照值.2C（二倍体）＜1.25×P50，3～4C≥（1.25～2.25）×P50，5C≥（2.25～2.75）×P50.＞5C的细胞作为异倍体细胞.DNA含量用DN

7、A指数（DI）表示，DI=肿瘤细胞核IA均值/淋巴细胞核IA均值.二倍体DI=0.90～1.10，大于或小于此值为异倍体.DI值不在0.90～1.10范围，并且有＞5C的细胞，作为判定异倍体的标准.统计学处理:应用SPSS10.0统计软件对资料进行统计学处理，组间均数比较用t检验，率的比较用χ2检验.以P＜0.05为差别有统计学意义.2结果2.1Ecad和CD44v6表达Ecad与CD44v6在浸润性乳腺癌组织的表达与组织学分级及组织浸润程度均有密切关系(P＜0.05），与组织学类型无关（P＞0.05,表1）.在56例有随

8、访记录的患者中，Ecad表达与年龄、肿瘤大小、生存时间无关（P＞0.05），与淋巴结转移、复发、远处转移有关系(P＜0.05）；CD44v6表达与年龄无关（P＞0.05），与肿瘤大小、淋巴结转移、复发、远处转移、生存时间均有关系（P＜0.05,表1).Ecad与CD44v