农药咪鲜安雌激素样作用机制体外研究

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1、农药咪鲜安雌激素样作用机制体外研究【关键词】咪鲜安；雌激素样作用；MCF-7细胞；雌激素受体　　摘要：目的用体外试验检测农药咪鲜安的雌激素样作用，并对其可能的作用机制进行探讨。方法将人乳腺癌细胞株（MCF-7）细胞在含10%小牛血清的RPM11640培养基中进行半开放式贴壁培养，加受试物前2周，改在含10%去激素小牛血清的无酚红RPMI1640培养基中培养。设溶剂对照组、阳性对照组及5个不同浓度的咪鲜安样品组，采用MCF-7细胞增殖试验、四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）试验和生长曲线观察咪鲜安对MCF-7细胞增殖的影响，并通过雌激素受

2、体（ER）结合试验分析咪鲜安与ER的结合情况，探讨可能的作用机制。结果咪鲜安在10-7～10-5mol/L剂量范围内可诱导MCF-7细胞增殖，差异有统计学意义（P005或P001），且存在剂量-效应关系；咪鲜安能竞争性地与ER结合，从而抑制125I-E2与ER结合。结论咪鲜安具有雌激素样作用，其作用机制在于其竞争性地与ER的结合。　　关键词：咪鲜安；雌激素样作用；MCF-7细胞；雌激素受体　　Studyonestrogenicactivityandmechanismofprochlorazinvitro　　Abstrat:Obj

3、ectiveToexaminetheestrogenic-likeactivityofthepesticideprochlorazbytestsinvitroandstudythepossiblemechanism.MethodsMCF-7cellsaintainedinRPMI1640mediumcontaining10%bovineserum.Tedintophenolred-freeRPMI1640mediumcontaining10%charcoal/dextrantreatedbovineserum.Thereares

4、evencellgroupsdealents:avehiclecontrolgroup,apositivegroupandfiveproliferationtest,MTTtestandgrool/Lvehiclecontrol(P0.05orP0.01).Ourstudyalsoshoa公司)；125I-E2及分离试剂(北京北方生物制品研究所)；MTT(上海华舜生物工程有限公司)；二甲基亚矾(DMSO，天津市化学试剂一厂)；RPMI1640培养基、无酚红RPMI1640培养基产品(美国Hyclone公司)；高融合型细胞培养用小

5、牛血清、去激素小牛血清(上海纬群生物工程有限公司)。　　13试验方法　　131细胞培养与观察MCF-7细胞培养在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中，在37℃恒温、5％CO2、100％湿度下培养。用含025％胰酶、002％乙二胺四乙酸(EDTA)的消化液消化传代。正式试验开始前2周〔3〕，将MCF-7细胞转入上激素培养基(含10％上激素小牛血清的无酚红RPMI1640培养基)中培养。　　132咪鲜安对MCF-7细胞增殖的影响(1)MCF-7细胞增增殖试验：将在去激素培养基中培养的MCF-7细胞消化接种于24孔细胞培养板，浓

6、度为5×103个细胞／ml，每孔加1ml去激素培养基，预培养24h后，弃去旧培养基，每孔加2ml含各剂量受试物的上激素培养基。以无水乙醇(1％)为溶剂对照，以E2(10-9mol／L)为阳性对照，咪鲜安设10-8，10-7，10-6，10-5，10-4mol／L等5个剂量组。各组设3个以上平行样。在37℃恒温、5％CO2、100％湿度下培养5d后，用含025％胰酶、002％EDTA的消化液消化，用吸管吹打均匀，用血球计数板计数。以增殖效应(proliferativeeffect,PE)、相对增殖效应(relativeprolif

7、erativeeffect,RPE)作为评价指标，计算公式为：PE=试验组细胞数／溶剂对照组细胞数；RPE=(试验组PE-1)／(阳性对照组PE-1)×100％。(2)MTT试验：参照文献〔4〕方法进行。　　133咪鲜安对MCF-7细胞生长曲线的影响细胞培养同MCF-7细胞培养增殖试验，咪鲜安剂量为10-5mol／L，以无水乙醇(1％)为溶剂对照，以E2(10-9mol／L)为阳性对照。细胞培养至1、3、5、7d后，消化，用红细胞计数板计数，并绘制各组MCF-7细胞生长曲线。　　134雌激素受体(ER)结合试验参照文献〔5〕方法

8、进行。阳性对照E2采用了5个浓度(10×10-10，50×10-10，10×10-9，50×10-10和10×10-8)，同时设溶剂对照(无水乙醇)和阴性对照。　　2结果　　21咪鲜安对MCF-7细胞增殖的影响　　211MCF-7细胞增殖试验(表1)咪鲜安在10