农药咪鲜安雌激素样作用机制体外研究论文

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1、农药咪鲜安雌激素样作用机制体外研究论文.freelol/L剂量范围内可诱导MCF-7细胞增殖，差异有统计学意义（P005或P001）.freelechanismofprochlorazinvitroAbstrat:ObjectiveToexaminetheestrogenic-likeactivityofthepesticideprochlorazbytestsinvitroandstudythepossiblemechanism.MethodsMCF-7cellsaintainedinRPMI1640mediumcontaining10%bovineserum.Tedin

2、tophenolred-freeRPMI1640mediumcontaining10%charcoal/dextrantreatedbovineserum.Therearesevencellgroupsdealents:avehiclecontrolgroup,apositivegroupandfiveproliferationtest,MTTtestandgrool/Lvehiclecontrol(P0.05orP0.01).Ourstudyalsoshoa公司)；125I-E2及分离试剂(北京北方生物制品研究所)；MTT(上海华舜生物工程有限公司)；二甲基亚矾(DMSO

3、，天津市化学试剂一厂)；RPMI1640培养基、无酚红RPMI1640培养基产品(美国Hyclone公司)；高融合型细胞培养用小牛血清、去激素小牛血清(上海纬群生物工程有限公司)。13试验方法131细胞培养与观察MCF-7细胞培养在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中，在37℃恒温、5％CO2、100％湿度下培养。用含025％胰酶、002％乙二胺四乙酸(EDTA)的消化液消化传代。正式试验开始前2周〔3〕，将MCF-7细胞转入上激素培养基(含10％上激素小牛血清的无酚红RPMI1640培养基)中培养。132咪鲜安对MCF-7细胞增殖的影响(1)MCF-7细胞增增殖试验

4、：将在去激素培养基中培养的MCF-7细胞消化接种于24孔细胞培养板，浓度为5×103个细胞／ml，每孔加1ml去激素培养基，预培养24h后，弃去旧培养基，每孔加2ml含各剂量受试物的上激素培养基。以无水乙醇(1％)为溶剂对照，以E2(10-9mol／L)为阳性对照，咪鲜安设10-8，10-7，10-6，10-5，10-4mol／L等5个剂量组。各组设3个以上平行样。在37℃恒温、5％CO2、100％湿度下培养5d后，用含025％胰酶、002％EDTA的消化液消化，用吸管吹打均匀，用血球计数板计数。以增殖效应(proliferativeeffect,PE)、相对增殖效应(re

5、lativeproliferativeeffect,RPE)作为评价指标，计算公式为：PE=试验组细胞数／溶剂对照组细胞数；RPE=(试验组PE-1)／(阳性对照组PE-1)×100％。(2)MTT试验：参照文献〔4〕方法进行。133咪鲜安对MCF-7细胞生长曲线的影响细胞培养同MCF-7细胞培养增殖试验，咪鲜安剂量为10-5mol／L，以无水乙醇(1％)为溶剂对照，以E2(10-9mol／L)为阳性对照。细胞培养至1、3、5、7d后，消化，用红细胞计数板计数，并绘制各组MCF-7细胞生长曲线。134雌激素受体(ER)结合试验参照文献〔5〕方法进行。阳性对照E2采用了5个浓

6、度(10×10-10，50×10-10，10×10-9，50×10-10和10×10-8)，同时设溶剂对照(无水乙醇)和阴性对照。2结果21咪鲜安对MCF-7细胞增殖的影响211MCF-7细胞增殖试验(表1)咪鲜安在10-7～10-5mol/L剂量范围内可诱导MCF-7细胞增殖，与溶剂对照组比较差异有统计学意义(P005，P001)，且存在剂量-效应关系，在10-5mol/L可诱导MCF-7细胞最大增殖，其RPE为12584％。表1咪鲜安MCF-7细胞增殖的影响（略）注：与溶剂对照组比较，*P005，**P001212MTT试验(表2)与溶剂对照组比较，10-5mol／L咪

7、鲜安作用24h可促进MCF-7细胞增殖(P005)，随着作用时间延长至96h，10-7～10-5mol／L咪鲜安均能促进MCF-7细胞增殖(P005，P001)，且咪鲜安对MCF-7细胞的增殖作用存在剂量-效应关系和时间-效应关系。22咪鲜安对MCF-7细胞生长曲线的影响(图1)咪鲜安(浓度为10-8mol／L)刺激MCF-7细胞增殖的生长曲线与E2(浓度为10-9mol／L)相似，从作用第3d开始，与溶剂对照组比较，咪鲜安、E2生长曲线明显上移，且在培养3～7d细胞处于对数生长期。23雌激素受体（ER）结合试验2