农药咪鲜安雌激素样作用机制体外研究论文

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1、农药咪鲜安雌激素样作用机制体外研究论文.freelol/L剂量范围内可诱导MCF-7细胞增殖,差异有统计学意义(P005或P001).freelechanismofprochlorazinvitroAbstrat:ObjectiveToexaminetheestrogenic-likeactivityofthepesticideprochlorazbytestsinvitroandstudythepossiblemechanism.MethodsMCF-7cellsaintainedinRPMI1640mediumcontaining10%bovineserum.Tedin

2、tophenolred-freeRPMI1640mediumcontaining10%charcoal/dextrantreatedbovineserum.Therearesevencellgroupsdealents:avehiclecontrolgroup,apositivegroupandfiveproliferationtest,MTTtestandgrool/Lvehiclecontrol(P0.05orP0.01).Ourstudyalsoshoa公司);125I-E2及分离试剂(北京北方生物制品研究所);MTT(上海华舜生物工程有限公司);二甲基亚矾(DMSO

3、,天津市化学试剂一厂);RPMI1640培养基、无酚红RPMI1640培养基产品(美国Hyclone公司);高融合型细胞培养用小牛血清、去激素小牛血清(上海纬群生物工程有限公司)。13试验方法131细胞培养与观察MCF-7细胞培养在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中,在37℃恒温、5%CO2、100%湿度下培养。用含025%胰酶、002%乙二胺四乙酸(EDTA)的消化液消化传代。正式试验开始前2周〔3〕,将MCF-7细胞转入上激素培养基(含10%上激素小牛血清的无酚红RPMI1640培养基)中培养。132咪鲜安对MCF-7细胞增殖的影响(1)MCF-7细胞增增殖试验

4、:将在去激素培养基中培养的MCF-7细胞消化接种于24孔细胞培养板,浓度为5×103个细胞/ml,每孔加1ml去激素培养基,预培养24h后,弃去旧培养基,每孔加2ml含各剂量受试物的上激素培养基。以无水乙醇(1%)为溶剂对照,以E2(10-9mol/L)为阳性对照,咪鲜安设10-8,10-7,10-6,10-5,10-4mol/L等5个剂量组。各组设3个以上平行样。在37℃恒温、5%CO2、100%湿度下培养5d后,用含025%胰酶、002%EDTA的消化液消化,用吸管吹打均匀,用血球计数板计数。以增殖效应(proliferativeeffect,PE)、相对增殖效应(re

5、lativeproliferativeeffect,RPE)作为评价指标,计算公式为:PE=试验组细胞数/溶剂对照组细胞数;RPE=(试验组PE-1)/(阳性对照组PE-1)×100%。(2)MTT试验:参照文献〔4〕方法进行。133咪鲜安对MCF-7细胞生长曲线的影响细胞培养同MCF-7细胞培养增殖试验,咪鲜安剂量为10-5mol/L,以无水乙醇(1%)为溶剂对照,以E2(10-9mol/L)为阳性对照。细胞培养至1、3、5、7d后,消化,用红细胞计数板计数,并绘制各组MCF-7细胞生长曲线。134雌激素受体(ER)结合试验参照文献〔5〕方法进行。阳性对照E2采用了5个浓

6、度(10×10-10,50×10-10,10×10-9,50×10-10和10×10-8),同时设溶剂对照(无水乙醇)和阴性对照。2结果21咪鲜安对MCF-7细胞增殖的影响211MCF-7细胞增殖试验(表1)咪鲜安在10-7~10-5mol/L剂量范围内可诱导MCF-7细胞增殖,与溶剂对照组比较差异有统计学意义(P005,P001),且存在剂量-效应关系,在10-5mol/L可诱导MCF-7细胞最大增殖,其RPE为12584%。表1咪鲜安MCF-7细胞增殖的影响(略)注:与溶剂对照组比较,*P005,**P001212MTT试验(表2)与溶剂对照组比较,10-5mol/L咪

7、鲜安作用24h可促进MCF-7细胞增殖(P005),随着作用时间延长至96h,10-7~10-5mol/L咪鲜安均能促进MCF-7细胞增殖(P005,P001),且咪鲜安对MCF-7细胞的增殖作用存在剂量-效应关系和时间-效应关系。22咪鲜安对MCF-7细胞生长曲线的影响(图1)咪鲜安(浓度为10-8mol/L)刺激MCF-7细胞增殖的生长曲线与E2(浓度为10-9mol/L)相似,从作用第3d开始,与溶剂对照组比较,咪鲜安、E2生长曲线明显上移,且在培养3~7d细胞处于对数生长期。23雌激素受体(ER)结合试验2

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