碱性成纤维细胞生长因子在前列腺癌和良性前列腺增生组织中表达的意义

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1、碱性成纤维细胞生长因子在前列腺癌和良性前列腺增生组织中表达的意义刘艳波　沈维高　赵雪俭【摘要】目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在前列腺癌和良性前列腺增生组织中表达的意义。方法　采用斑点杂交和免疫组化法测定50例正常前列腺组织(正常对照组)、40例良性前列腺肥大(BPH)组织和48例前列腺癌组织中bFGF的表达情况。结果BPH和前列腺癌组织中bFGF的表达明显高于正常对照组(P＜001)。bFGF表达升高的程度与BPH的分度、前列腺癌的病理分级和临床分期关系不显著。结论bFGF与前列腺癌和前列腺增生的发生发展过程有关。【

2、关键词】前列腺增生；前列腺癌；碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)　　前列腺癌和前列腺增生是老年男性常见疾病。近年来研究资料表明前列腺癌和前列腺增生组织中存在许多分子表达异常，但是对其发病机制尚缺乏统一的认识〔1,2〕。碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrooreJeAb)购自Invitrogen公司。兔抗鼠IgG和ELISA试剂购自福州迈新生物试剂公司。限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅡ购自宝生物公司。DAB显色试剂盒购自南京建成生物试剂公司。　　13方法　　131正常前列腺、BPH和前列腺癌的斑点杂

3、交　　①探针制备和标记：bFGF质粒转化、扩增及提取，参照文献〔4〕方法进行，所得bFGF质粒经EcoRⅠ和HindⅡ酶切回收探针片段。探针标记采用荧光素标记试剂盒随机引物法。②细胞总RNA提取：采用异硫氰酸胍一步法。③RNA斑点杂交：以相同浓度总RNA点膜。④检测：采用试剂盒发光自显影法检测，显影胶片应用计算机图像分析技术测定斑点平均吸光度(A)值。　　132正常前列腺、BPH和前列腺癌的免疫组化染色　　鼠抗人bFGFmAb孵育前，用微波炉进行抗原修复10min，鼠抗人bFGFmAb的工作浓度1∶100。用PBS代替鼠抗人b

4、FGFmAb作为阴性对照，以DAB显色，透明封片。　　14判定标准　　所有阳性染色特征为棕黄色颗粒，位于细胞胞质内。随机观察5～10个视野，计算100个腺上皮细胞或癌细胞阳性细胞数，取其均值。阳性细胞数＜10%者(-)，10%～29%者(+)，30%～59%者()，≥60%者()。　　15统计学处理　　应用SPSS100软件包进行统计分析，数据用x±s表示，采用χ2及秩和检验。　　2结果　　21各组bFGFmRNA表达量比较　　正常对照组中bFGFmRNA表达量低（23±11），BPH组（178±29）和前列腺癌组（2

5、65±24）中bFGFmRNA表达较高。前列腺癌及BPH组织中mRNA表达水平与正常对照组之间比较差异显著(P＜005)。　　22不同分化程度的BHP组织中bFGFmRNA表达水平比较　　BHPⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ度组织bFGFmRNA表达水平(pg/μl)分别为197±24（n=8）、186±27（n=12）、169±22（n=9）、188±31（n=11）。经方差分析,4组组间bFGFmRNA的表达无明显差异,提示bFGFmRNA的表达与BPH的分化无明显关系。　　23不同分化程度的前列腺癌组织中bFGFmRNA表达水平比较　

6、　高、中、低分化的前列腺癌组织中bFGFmRNA表达水平(pg/μl)分别为273±28（n=15）、261±29（n=19）、254±20（n=14）。经方差分析,三者bFGFmRNA的表达无明显差异,提示bFGFmRNA的表达与前列腺癌的病理分级无明显关系。　　24各组免疫组化染色结果比较　　见图1。正常对照组bFGF呈阴性,BPH组阳性表达率为725%(29/40)，与正常对照组比较差异显著(P＜005)。BPH阳性病例中,阳性染色主要位于基质细胞。前列腺癌组bFGF的表达率为767%(36/48)，其中“+”15例

7、,“”19例,“”14例，阳性染色位于癌细胞质,与正常对照组比较差异显著(P＜005)。bFGF的染色强度与前列腺癌的病理分级、临床分期及BPH的分度均无图1各组组织中bFGF免疫组化染色明显关系(P＞005)。　　25不同oreJeRNA表达水平比较　　A、B、C、D各期的前列腺癌组织中bFGFmRNA表达水平(pg/μl)分别为248±31（n=12）、259±19（n=10）、264±26（n=16）、257±28（n=10）。经方差分析,4组组间bFGFmRNA的表达无明显差异,提示bFGFmRNA的表达与前列

8、腺癌的临床分期无明显关系。　　3讨论　　bFGF基因位于人的第5对染色体上，为单拷贝基因，呈不连续状态，其功能区被两个内含子隔开分为3个外显子区域。bFGF基因长度大于38kb，第一个内含子位于第60、61位密码间，第二个内含子位于第94、95位密