肺腺癌患者血清生物标志物的筛选研究论文

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时间:2018-11-25

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1、肺腺癌患者血清生物标志物的筛选研究论文【摘要】目的采用SELDI-TOF-MS技术探讨肺腺癌患者血清蛋白标志物,并建立一个稳定、简便、快速的实验方法。方法肺腺癌患者321例和正常对照人群321例,按照年龄、性别、吸烟史的有无进行1:1配对,采用S【Abstract】ObjectiveToselectrelativespecificbiomarkersinserumfromlungadenocarcinomapatientsusingsurface-enhancedlaserdesorptionandionizationtimeofflightmassspectromet

2、ry(SELDI-TOF-MS)proteinchiptechnology.MethodsSerumsamplesfrom321lungadenocarcinomapatients,321healthyvolunteersatchedgender,ageandhistoryofsmokingarkers.Proteomicspectraassspectrometry.ResultsFivehighlyexpressedpotentialbiomarkersolecularaade1.5.Thesensitivityfordiagnosinglungadenocarcin

3、omaethodcapableofselectingseveralrelativelyspecific,potentialbiomarkersfromtheserumoflungadenocarcinomapatientsandmayhaveattractiveclinicvalue.【Keya;biomarkers;SELDI-TOF-MS;proteomics肺癌是目前全球发病率最高的恶性肿瘤之一,对人类健康的危害日益严重。目前,肺癌早期诊断困难。80%肺癌患者就诊时已属晚期,失去了手术根治的机会,放疗化疗效果不佳,5年生存率不到15%;而早期肺癌手术后5年存活率达

4、70%[1],但肺癌早期确诊率只有约15%,故肺癌总的预后不良,与肺癌缺乏有效的早期诊断手段有关。因此,寻找灵敏度、特异性高的早期诊断方法是目前临床亟待解决的问题之一。蛋白质组学作为后基因组学时代的重要研究工具,在肿瘤研究中已广泛应用。表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术(surface-enhancedlaserdesorptionIonizationtimeofflightmassspectrometry,SELDI-TOF-MS)是一种新兴的蛋白质组学研究技术。使用这种技术,组分复杂的生物样品(如细胞液或体液)中的各种蛋白质通过特定的表面基团吸附于蛋白质芯片上,

5、用激光脉冲辐射使结合在芯片上的蛋白质解析形成荷电离子,这些不同质荷比的离子在真空电场中飞行的时间长短不同,据此绘制出质谱图,可以简便、快速地获得各种蛋白质的分子量、丰度等信息。本研究使用SELDI技术,检测已明确诊断肺腺癌的患者血清样本,绘制蛋白质质谱图,分别与正常人进行比照,筛选出肺腺癌显著高表达的潜在标志物5个,并建立决策树模型对样品进行筛选。寻找肺癌发生发展的生物标志物,从而为肺癌的早期诊断提供新的依据。1对象与方法1.1研究对象1.1.1样本来源来自上海长征医院等收治的肺腺癌患者321例,其中男187例,女134例,平均年龄60.25±11.58岁(29~76岁

6、)。321例肺腺癌患者均手术后病理证实为肺腺癌。所有肺腺癌患者于术前抽取清晨空腹前臂静脉全血5ml。正常人群321例,男167例,女154例,平均年龄60.23±7.53岁(28~76岁),均为无疾病证据的医务人员及健康体检者。分别抽取清晨空腹前臂静脉全血5ml。1.1.2实验分组642例样品中,100例(50例患者、50例对照)用于检测后建立决策树模型,随机抽取60例(30例患者、30例对照)用于建模后的筛选研究。1.2方法1.2.1血清标本制备上述所有肺腺癌患者和正常志愿者的静脉血标本,于4℃下3000转/min离心10min,取血清,分装后保存于-80℃冰箱。1.

7、2.2蛋白质芯片检测(1)平衡芯片:取50mmol/LpH=3.0的醋酸钠(NaAc)溶液200μl/孔加入芯片的加样孔中,平衡芯片2次,每次5min。(2)血清样品稀释:取6μl血清样品,加入234μl50mmol/LpH=3.0的NaAc溶液中,混匀稀释。(3)芯片上样:取稀释后的血清样品200μl/孔加入芯片的加样孔,置芯片于摇床混匀90min。(4)样品洗脱:取50mmol/LpH=3.0的NaAc溶液200μl/孔加入芯片加样孔,洗脱2次,每次5min。取300μl/孔的去离子水冲洗芯片。(5)蛋白质获能:取能量吸收剂SPA(含

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