肺腺癌患者血清生物标志物的筛选研究

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1、肺腺癌患者血清生物标志物的筛选研究【摘要】目的采用SELDI-TOF-MS技术探讨肺腺癌患者血清蛋白标志物，并建立一个稳定、简便、快速的实验方法。方法肺腺癌患者321例和正常对照人群321例，按照年龄、性别、吸烟史的有无进行1:1配对，采用S；蛋白质组学ThescreeningstudyonlungadenocarcinomaserumbiomarkersbySELDI-TOF-MS【Abstract】ObjectiveToselectrelativespecificbiomarkersinserumfromlungadenocarcinomapat

2、ientsusingsurface-enhancedlaserdesorptionandionizationtimeofflightmassspectrometry(SELDI-TOF-MS)protEinchiptechnology.MethodsSerumsamplesfrom321lungadenocarcinomapatients，321healthyvolunteersatchedgender，ageandhistoryofsmokingarkers.Proteomicspectraassspectrometry.ResultsFivehi

3、ghlyexpressedpotentialbiomarkersolecularaade1.5.Thesensitivityfordiagnosinglungadenocarcinomaethodcapableofselectingseveralrelativelyspecific，potentialbiomarkersfromtheserumoflungadenocarcinomapatientsandmayhaveattractiveclinicvalue.【Keya;biomarkers;SELDI-TOF-MS;proteomics肺癌是目前

4、全球发病率最高的恶性肿瘤之一，对人类健康的危害日益严重。目前，肺癌早期诊断困难。80%肺癌患者就诊时已属晚期，失去了手术根治的机会，放疗化疗效果不佳，5年生存率不到15%；而早期肺癌手术后5年存活率达70%［1］，但肺癌早期确诊率只有约15%，故肺癌总的预后不良，与肺癌缺乏有效的早期诊断手段有关。因此，寻找灵敏度、特异性高的早期诊断方法是目前临床亟待解决的问题之一。蛋白质组学作为后基因组学时代的重要研究工具，在肿瘤研究中已广泛应用。表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术（surface-enhancedlaserdesorptionIonizatio

5、ntimeofflightmassspectrometry，SELDI-TOF-MS）是一种新兴的蛋白质组学研究技术。使用这种技术，组分复杂的生物样品(如细胞液或体液)中的各种蛋白质通过特定的表面基团吸附于蛋白质芯片上，用激光脉冲辐射使结合在芯片上的蛋白质解析形成荷电离子，这些不同质荷比的离子在真空电场中飞行的时间长短不同，据此绘制出质谱图，可以简便、快速地获得各种蛋白质的分子量、丰度等信息。本研究使用SELDI技术，检测已明确诊断肺腺癌的患者血清样本，绘制蛋白质质谱图，分别与正常人进行比照，筛选出肺腺癌显著高表达的潜在标志物5个，并建立决策树模型对

6、样品进行筛选。寻找肺癌发生发展的生物标志物，从而为肺癌的早期诊断提供新的依据。1对象与方法1.1研究对象1.1.1样本来源来自上海长征医院等收治的肺腺癌患者321例，其中男187例，女134例，平均年龄60.25±11.58岁(29～76岁)。321例肺腺癌患者均手术后病理证实为肺腺癌。所有肺腺癌患者于术前抽取清晨空腹前臂静脉全血5ml。正常人群321例，男167例，女154例，平均年龄60.23±7.53岁(28～76岁)，均为无疾病证据的医务人员及健康体检者。分别抽取清晨空腹前臂静脉全血5ml。1.1.2实验分组642例样品中，100例（50例患

7、者、50例对照）用于检测后建立决策树模型，随机抽取60例（30例患者、30例对照）用于建模后的筛选研究。1.2方法1.2.1血清标本制备上述所有肺腺癌患者和正常志愿者的静脉血标本，于4℃下3000转/min离心10min，取血清，分装后保存于－80℃冰箱。1.2.2蛋白质芯片检测（1）平衡芯片：取50mmol/LpH=3.0的醋酸钠（NaAc）溶液200μl/孔加入芯片的加样孔中，平衡芯片2次，每次5min。（2）血清样品稀释：取6μl血清样品，加入234μl50mmol/LpH=3.0的NaAc溶液中，混匀稀释。（3）芯片上样：取稀释后的血清样品2

8、00μl/孔加入芯片的加样孔，置芯片于摇床混匀90min。（4）样品洗脱：取50mmol/LpH=3.0的N