中国被毛孢发酵物对小鼠t、b淋巴细胞转化功能的影响

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1、中国被毛孢发酵物对小鼠T、B淋巴细胞转化功能的影响【摘要】［目的］观察中国被毛孢发酵物对正常小鼠T、B淋巴细胞转化功能的影响。［方法］给予小鼠高（1.0g·kg-1）、低（0.1g·kg-1）剂量的中国被毛孢发酵物，观察其对小鼠T、B淋巴细胞转化功能的影响。［结果］中国被毛孢发酵物和冬虫夏草均能显著提高正常小鼠脾T和B淋巴细胞转化刺激指数（P<0.05，P<0.01）；［结论］中国被毛孢发酵物和冬虫夏草均均能提高正常小鼠免疫功能。【关键词】中国被毛孢发酵物；T淋巴细胞；B淋巴细胞　　Abstract：［Objective］Toobs

2、ervetheproliferationofTandBLymphocyteinmouseaftertreatedbyHirsutellasinensisstrainfermentation.［Methods］Miceentationbyintragastricadministration.TheproliferationofTandBLymphocytefromthespleenofmouseisdetectedbytheMTTassay.［Results］HirsutellasinensisstrainfermentationandCordy

3、cepsSinensiscandistinctlyincreassethestimulationindex（SI）ofTandBlymphocytetransformation.［Conclusion］HirsutellasinensisstrainfermentationandCordycepsSinensisareabletoenhanceimmunefunctionofnormalmouse.　　Keyentation;Tlymphocyte;Blymphocyte中国被毛孢是从青海新鲜冬虫夏草分离的冬虫夏草菌种，通过人工液体发酵并冻干得

4、到中国被毛孢发酵物。90年代通过分子生物学方法鉴定，多次证明中国被毛孢为冬虫夏草无性型［13］。由于该菌种分离与培养都较其他真菌困难，中国被毛孢发酵物药理研究报道甚少，本实验初步观察了中国被毛孢发酵物对正常小鼠免疫系统的影响。　　1材料　　1.1药物和试剂　　中国被毛孢发酵物：黄色粉末，由杭州泰士生物科技有限公司提供，给药前药物高、低剂量组用蒸馏水分别配制成100mg·ml-1、10mg·ml-1的混悬液；冬虫夏草：杭州泰士生物科技有限公司提供，由青海省畜牧兽医科学院沈南英教授鉴定，临用前将冬虫夏草60℃烘干，打粉，药物高、低剂量组用蒸馏水分

5、别配制成100mg·ml-1、10mg·ml-1的混悬液；刀豆素（ConA）：sigma公司，批号：11028710；脂多糖（LPS）：sigma公司，批号：024K4067；RPMI1640培养液：GIBCO公司，批号：1165062；噻唑蓝（MTT）溶液：sigma公司，批号：3154B79。　　1.2动物　　18～20gSPF级ICR小鼠，来源：中科院上海实验动物试验中心/上海斯莱克实验动物公司，生产许可证：SCXK（沪）20070006。　　1.3仪器设备　　128C340型酶标仪：奥地利CliniBio公司；CB150型CO

6、2培养箱：德国Binder公司；DL5B型离心机：上海安亭科学仪器厂制造；ZEiSSAXIOVERT200倒置显微镜：德国ZEISS公司。　　2方法　　2.1分组　　取18～20g的雄性ICR小鼠50只，按体重随机分5成组：空白对照组、中国被毛孢发酵物高剂量组1.0g·kg-1、中国被毛孢发酵物低剂量组0.1g·kg-1、冬虫夏草高剂量组1.0g·kg-1及冬虫夏草低剂量组0.1g·kg-1，每组10只。　　2.2给药方法　　除空白对照组灌蒸馏水外，其余组每d灌胃给药1次，连续7d。　　2.3小鼠脾淋巴细胞悬浮液的制备［45］　　末次给药

7、后30min，小鼠摘眼球放血致死，75%乙醇浸泡5min，无菌取脾，用1ml注射器塞磨碎，尼龙绸布过滤到10ml离心管中，用Hank’s液洗涤，合并洗涤液，1500rpm离心5min，弃上清，加Hank’s液至7ml，细胞混匀，再离心，重复2次。进行细胞计数，以RPMI1640完全培养液稀释至1×107个/ml的脾细胞混悬液备用。　　2.4MTT法淋巴细胞增殖反应实验［45］　　新鲜分离的1×107cell/ml小鼠脾细胞悬液加入96孔细胞培养板中，每孔加100μl脾细胞混悬液，再根据实验设计加入刺激剂（ConA和LPS）50μl／孔，每个样

8、品设3个平行孔并设对照孔（仅加RPMI1640培养基），将培养板置于37℃的5%CO2培养箱中培养44h。每孔加入50μlMTT溶液（2mg/ml），