色素上皮源性因子对缺血—再灌注视网膜神经节细胞的保护作用

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1、色素上皮源性因子对缺血—再灌注视网膜神经节细胞的保护作用作者：李文化　杨永升　李海燕　马涛【摘要】　　目的：研究色素上皮源性因子（pigmentepitheliumderivedfactor，PEDF）对高眼压诱导的大鼠视网膜缺血—再灌注后视网膜神经节细胞的保护作用。方法：经眼角膜进行前房平衡盐水（BSS）灌注，维持眼内压110mmHg，以阻止视网膜正常血液灌注。60min后取出灌注针头，恢复视网膜正常血流，从而建立大鼠视网膜缺血—再灌注模型。实验分为正常非缺血组和视网膜缺血—再灌注组，后者又分为生理盐水注射对照组和

2、PEDF注射实验组，再灌注模型建立后立即向实验组大鼠玻璃体腔内注射0.2g/LPEDF2μL。实验对照组用同样方法注射等量生理盐水。分别于注射后2d和7d进行眼球摘除，对视网膜进行光学显微镜形态学观察和Fas原位杂交免疫学分析，探讨PEDF对缺血—再灌注视网膜神经节细胞的保护作用。结果：缺血—再灌注2d时生理盐水注射组和PEDF注射组视网膜神经节细胞明显少于正常对照组(P＜0.01)和(P＜0.05)，PEDF注射组视网膜神经节细胞数较生理盐水注射组明显较多，相比有显著性差异（P＜0.05）；视网膜神经节细胞计数再灌

3、注7d后结果与2d时类似。再灌注2d生理盐水注射组Fas阳性染色细胞比PEDF注射组明显较多（P＜0.05），生理盐水组比PEDF注射组阳性细胞百分率明显较高(P＜0.01)；再灌注7d时两组Fas阳性细胞计数无明显差异。结论：视网膜缺血—再灌注后即刻行玻璃体腔内PEDF注射可以改善视网膜神经节细胞的损伤并有一定保护作用。【关键词】视网膜缺血—再灌注损伤　色素上皮源性因子　凋亡　Fas　　PigmentepitheliumderivedfactorasaneuroprotectiveagentagainstIsche

4、mic-reperfusioninducedretinalgonglioncellinjuryAbstractAIM:Todetermineia-reperfusion.METHODS:TransientretinalischemiainutesinSDratseyes，immediatelyafterreperfusion，PEDFentaleyes.Injuryorphologicallyandbycountingthenumberoftheretinalganglioncells(RGC)andnumberof

5、Fasstainingcells.RESULTS:Morphologically，RGCsappearedturbulenceandcapsularchangesandmorphmetrically，thenumberofRGCsberofpositivestainedcellsinPEDFinjectedeyesmediatelyafterischemic-reperfusioncanameliorateretinalgonglioncellsinjury.Itmaybeusefulinpreventingneur

6、onaldamageintheretinalgonglioncelllayerinducedbyretinalischemia.·KEYEDSABC酶复合物，37℃湿盒孵育40min，冲洗后滴加DAB显色5min，水洗终止，苏木素复染核，脱水，封片，显微镜下观察结果。为评价视网膜缺血损害的神经节细胞丢失程度，按照已有研究证明，给大鼠玻璃体腔内预先注射微量腺病毒介导的色素上皮源性因子，在大鼠视网膜再灌注7d后观察发现，PEDF注射组视网膜厚度及神经节细胞密度明显高于未注射组[20]，证明PEDF对视网膜缺血—再灌注损伤

7、有抑制作用。本实验结果表明，视网膜缺血—再灌注后立即行眼球内PEDF注射在再灌注后2d及7d时神经节细胞的计数较对照组明显增多(P<0.05)，FAS免疫染色阳性细胞数却较对照组明显减少（P<0.01）。然而在两组再灌注后7d时FAS阳性细胞数及阳性率却没有明显差异。该结果进一步证实了PEDF对视网膜缺血—再灌注早期损伤具有一定的保护作用，而晚期视网膜的改变则可能以神经节细胞的变性、坏死为主的理论[1]。视网膜缺血—再灌注后又可以诱发机体以及眼局部自身的代偿保护机制，例如：热休克蛋白HSP70mRNA的高

8、表达[21]以及机体抗氧化系统的活化等[22]，而这些自身保护因子的作用又可以减轻或延缓这种眼压升高而引起的视网膜缺血—再灌注损伤，因此，再灌注后视网膜神经节细胞形态及功能的恢复并非单一保护因子的作用。由于两实验组2d和7d时RGC计数相比无明显差异，由此推测可能存在多种因子对RGCs的保护作用。众所周知，神经营养因子的保护作用有剂量依赖性，需