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时间:2018-11-24
《肿瘤坏死因子基因多态性与多发性骨髓瘤的 临床相关关系》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、肿瘤坏死因子基因多态性与多发性骨髓瘤的临床相关关系【摘要】目的探讨肿瘤坏死因子α(Tumornecrosisfactoralpha,TNFα)基因–308位和淋巴毒素(Lymphotoxinα,LTα)基因+252位基因多态性与多发性骨髓瘤(MultipleMyeloma,MM)发病、临床及预后的相关关系。方法用聚合酶链反应(PCR)、限制性内切酶消化及电泳技术,对32名MM患者和72名正常对照者的TNFα和LTα基因的单碱基突变多态性进行检测,并收集病人组的临床资料,进行生存状况分析。结果(1)MM病人TNF两位点基因型频率、等位基因频率、联合单倍体分型中各型的频率与对照组比较差
2、异均无统计学意义(P>0.05);(2)比较MM病人两位点联合单倍体分型在不同性别、分期、肿瘤负荷、血红蛋白、血钙、血肌酐中的分布,没有发现显著性差异(P>0.05);(3)用KaplanMEier方法进行生存分析,没有发现高危型与低危型的总生存时间有显著性差异:在高危型组和低危型组,2年生存率和4年生存率差异无统计学意义(P>0.05);Cox回归模型显示两位点联合单倍体分型不是影响预后的危险因素(P>0.05)。结论本组研究显示TNFα–308位、LTα+252位基因多态性在MM病人发病的易感性、临床和预后中可能不起重要作用。【关键词】多发性骨髓瘤肿瘤坏
3、死因子基因多态性0引言多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)是来源于淋巴细胞系统的异常浆细胞过度增生的恶性肿瘤。有研究发现肿瘤坏死因子(Tumornecrosisfactoralpha,TNF)可诱导MM细胞形成自分泌IL6环路;在骨髓,TNF与其它细胞因子形成一个细胞因子调控网络,调节MM细胞的生长。故一般认为,TNF可能与MM的发生或发展相关。淋巴毒素(LTα,又称为TNFβ)与TNFα同属一细胞因子家族,二者生物学效应类似。TNFα和LTα的基因多态性有可能通过影响这两种细胞因子的表达,进而影响MM的发生与发展。为探讨TNFα和LTα基因多态性与中国人MM发
4、病、临床和预后的相关性,我们对32名MM患者的TNFα和LTα基因的单碱基突变多态性进行检测,了解上述基因位点在广东地区MM病人中的分布情况,并对其进行临床观察与随访研究。1材料与方法1.1研究对象(1)MM组:32例,为2001年4月到2002年6月期间在中山大学第一附属医院、广东省人民医院住院确诊的MM患者,年龄44~72岁,中位年龄59岁;(2)对照组:72例,选自同期献血员和中山大学第一附属医院教职工,其中男性43名、女性29名,中位年龄24岁。上述所有观察对象均为广东汉族,彼此间无亲缘关系。1.2TNFα、LTα基因目的片段多态性的检测1.2.1DNA提取两组均取外周静脉血
5、1ml,EDTA抗凝,NaI法抽提基因组DNA。-80℃保存。1.2.2TNFα基因多态性片段的扩增扩增含TNFα–308位多态性位点片段的正反引物是5′AGGCAATAGGTTTTGAGGGCCAT3′和5′TCCTCCCTGCTCCGATTCCG3′。PCR扩增体系50μl,含10×Buffer5μl(含1.5mmol/LMgCl2),2mmol/LdNTP2.5μL,20mmol/L的正反引物各1μl,TaqDNA聚合酶(购自加拿大真达公司)2.5U,基因组DNA100~150ng。先热启动,94℃预变性2min,再以下列温度和时间循环35次:94℃60s,60℃60s
6、,72℃60s,最后再72℃延伸4min。循环中热盖温度103℃。扩增片段长度为107bp。1.2.3LTα基因多态性片段的扩增扩增含LTα+252位多态性位点片段的正反引物分别是5′CTCCTGCACCTGCTGCCTGGATC3′和5′GAAGAGACGTTCAGGTGGTGTCAT3′。PCR扩增体系(50μl),除20mmol/l的正反引物各0.6μl外,其余与TNFα的扩增体系相同。先95℃预变性10min,再95℃60s,64℃60s,72℃120s,如此循环31次,循环中热盖温度103℃。扩增片段长度为368bp。1.2.4NcoⅠ限制性内切酶消化扩增片段取PC
7、R扩增产物10μl,加入限制性内切酶NcoⅠ(购自宝生物公司)8U,依说明书加入BSA、10×KBuffer两种缓冲液各2μl,37℃孵育5h,孵育结束后加2μl10×LodingBuffer终止反应。两基因酶切方法和过程相同。1.2.5凝胶电泳TNFα消化产物以8%聚丙烯酰胺凝胶电泳,恒压450V,电泳2.5h,0.012mol/l硝酸银染色后在凝胶上呈现深棕色条带,干胶保存。LTα消化产物以2.5%琼脂糖凝胶电泳,100V40min,溴化乙锭(EB)染
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