毕业论文-重组表达质粒ppic9k-msbd-1的构建

《毕业论文-重组表达质粒ppic9k-msbd-1的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、本科毕业论文重组表达质粒pPIC9K-mSBD-1的构建There-constructionofpPIC9K-mSBD-1学院：兽医学院专业：动植物检疫姓名：郑佳琪学号：090115052指导教师：曹贵方职称：教授论文提交日期：二Ο一三年六月摘要研究发现，β-防御素主要由哺乳动物的皮肤、黏膜等上皮细胞产生，由38～42个氨基酸组成。其分子中带有较多正电荷，空间结构分为疏水区和带点区；折叠形成3束β-折叠片层结构，由6个保守的半胱氨酸残基形成3个二硫键稳定结构，由Cysl-Cys5、Cys2-Cys4、Cys3-Cys6相配对连接。二硫键可使小分子防御素紧密联结以防御蛋白酶水解，所以在富

2、含蛋白的吞噬溶酶体环境中仍保持其特性。这也是防御素区别于其他抗微生物肽的主要因素。因其抗菌谱广且抗菌效率高，作用机制独特，不易产生抗性等特点，在抗生素抗药性日趋严重的情况下，抗菌肽极有可能成为新的抗生药物的来源。本实验基于实验室已经构建好的质粒PUC57-mSBD-1-T，利用PCR技术，扩增绵羊β-防御素1成熟肽（mSBD-1）基因。扩增出的mSBD-1因与T载体成功连接后，将其亚克隆到毕赤酵母表达载pPIC9K上，构建真核表达质粒pPIC9K-mSBD-1。关键词：防御素毕赤酵母pPIC9K质粒There-constructionofpPIC9K-mSBD-1AbstractIt’

3、sfoundthatβ-defensinsismainlycomposedofmammalianskinandmucousmembraneepithelialcells,composedof38~42aminoacids.Becauseoftheirbroad-spectrumofantinicrobialactivityanddefenseagainstpositiveandnegativeGrams'bacteria,epiphyte,protozoanandenvelopedvirus,inadditionalβ-defensinshavedistinctiveantibacte

4、rialmechanism,andhardlyno-endurancetodrug,sotheresearchonβ-defensinshasbecomeahotspotintheworld.ThisexperimenbasesonthelaboratoryplasmidPUC57-mSBD-1-Twhichhasbeenbuilt,usingthePCRtechnologytoamplificatesheepmSBD-1gene.WiththeamplificatedmSBD-1andTcarriersuccessfullyconnected,puttheclonetocarryon

5、pPIC9Kpichiaexpression.SoeukaryoticexpressionplasmidpPIC9K-mSBD-1isbuilt.KeyWords:defensinsPichia.pastorisplasmidpPIC9K目录1引言11.1动物防御素的概述11.2β-防御素11.3防御素的应用前景21.4毕赤酵母表达的优点21.5选取质粒pPIC9K的优点31.6研究内容31.7存在的问题32材料与方法42.1材料42.2方法42.2.1绵羊β-防御素1成熟肽（mSBD-1）基因的克隆42.2.2pPIC9K-mSBD-1成熟肽重组质粒的构建73结果93.1mSBD-1

6、基因的克隆与测序93.2pPIC9K-mSBD-1成熟肽重组质粒的构建103.2.1目的片段与表达载体的双酶切结果103.2.2菌落PCR筛选阳性克隆结果113.2.3pPIC9K-mSBD-1测序结果114讨论125结语12致谢13参考文献14内蒙古农业大学学士学位论文131引言1.1动物防御素的概述在动物体内发现了一组具有抗菌作用的多肽,称之为抗菌肽。它们参与了抵抗微生物侵害的最初宿主防御活动,是内源免疫体系成分。目前已经从动物和植物中分离纯化出200种以上的多肽。抗菌肽是一种分子量少于100个氨基酸残基的多肽，它主要两大家族组成，防御素（defensins）和cathelicid

7、ins，它们广泛存在于哺乳动物的潘氏细胞和巨噬细胞内。20世纪80年代中期,Ganz研究组在研究吞噬细胞非依赖氧杀菌机制过程中，兔和人中性粒细胞胞浆颗粒中发现一系列一级结构相似的小分子阳离子肽,由于其广谱的抗微生物活性而首次以防御素一词作为这类肽的命名[1,2]。动物防御素是富含精氨酸残基的阳离子多肽,成熟肽形式其分子量3.5～6kDa,通常含有六个保守的半胱氨酸残基[3]，在动物体内以一种含有β-折叠和6个半胱氨酸形成的3对二硫键框架的抗菌肽