丹酚酸b对人脐静脉内皮细胞株细胞血管舒缩因子的影响论文

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1、丹酚酸B对人脐静脉内皮细胞株细胞血管舒缩因子的影响论文崔广智金树梅范英昌【摘要】目的探讨丹酚酸B对人脐静脉内皮细胞株(ECV304)血管内皮细胞血管舒缩因子一氧化氮/内皮素1(NO/ET1)及血栓素/前列环素(TXA2/PGI2)系统的影响，及其抗动脉粥样硬化(AS)作用的机制。方法通过建立肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的ECV304细胞损伤模型，放射免疫方法及硝酸还原酶法检测丹酚酸B对ECV304细胞培养液中NO、ET1及TXA2、PGI2的含量的影响。结果丹酚酸B能够提高内皮细胞损伤时NO的含量，同时降低ET1的含量

2、，各剂量组之间无显著差异(P0.05)，丹酚酸B可明显减少ECV304细胞培养液中TXA2的含量，各浓度的丹酚酸B均可明显增加ECV304细胞培养液中PGI2的含量，且低浓度的丹酚酸B作用较好。结论丹酚酸B可通过抑制血管内皮细胞损代办处从而发挥抗AS作用。【关键词】丹酚酸B;ECV304;一氧化氮/内皮素;血栓素/前列环素内皮细胞功能障碍是动脉粥样硬化(AS)形成的早期病变.freelittedbyK.Takahashi，NationalDefenseMedicalCollege.Tokorozaa，Japan);DMEM/F12培养基

3、(GIBICO);特级胎牛血清(FBS，TBD公司产品)。1.2试剂人重组肿瘤坏死因子(TNFα)(PeprotechECLtd)产品;吡咯烷二硫氨基甲酚酯(PDTC，Sigma公司提供)，丹酚酸B(国家“973”计划课题组提供);NO检测试剂盒：购于南京建成生物工程研究所;ET1、TXB2、6KetoPGF1α放射免疫分析试剂盒：购于北京北免东雅生物技术研究所。1.3仪器γ放射免疫计数器：GC400型，中国科技大学科技实业总公司中佳光电仪器分公司。1.4方法1.4.1TNFα损伤模型浓度及丹酚酸B、PDTC药物浓度筛选(MT

4、T法)取生长良好的细胞消化后制成细胞悬液，调整细胞密度为2×105ml-1接种于96孔板，200μl/孔。细胞贴壁长满后，换用无血清培养液进行同步化培养12h，分别按不同浓度分组给药，同时设空白对照，每组设10个复孔，培养24h后，每孔加入20μlMTT溶液(5mg/ml)，继续孵育4h终止培养，小心弃去上清液，每孔加入150μlDMSO,轻轻振荡10min，混匀，选择570nm波长，在酶标仪上测定各孔的OD值，然后确立TNFα损伤模型浓度及丹酚酸B、PDTC用药浓度。1.4.2细胞损伤模型建立及药物分组将ECV304细胞悬液，接种于

5、24孔板，调节细胞接种密度为2×105按实验分为6组，即正常对照组、模型组(TNFα10ng/ml)、PDTC低剂量组(1.25μmol/L)、PDTC高剂量组(2.5μmol/L)、丹酚酸B低、高剂量组，每组设6个复孔,待细胞长满孔底，按各剂量组加药，培养2h后，模型组及各给药组分别加入TNFα刺激8h，取细胞培养上清液，用硝酸还原酶法测定NO含量;用放射免疫方法测定ET1、TXB2、6KetoPGF1α含量。1.5统计学方法采用SPSS10.0软件分析系统进行方差分析，方差齐性检验后，组间比较采用LSD法进行比较分析。2结果

6、2.1各组细胞上清液NO、EF1含量用TNFα诱导人脐静脉ECV304细胞培养液中NO含量明显降低，同时ET1含量明显升高，用丹酚酸B与TNFα共同培养的ECV304培养液中，NO含量均比模型组明显升高(P0.05)，ET1含量明显降低(P0.01)。见表1。2.2各组细胞上清液TXB2、6KetopGF1α含量用放免法测定ECV304细胞培养液中TXB2和6KetoPGF1α的含量，当内皮细胞受到TNFα刺激后，培养液中6KetoPGF1α含量减少，而TXB2明显增高。各浓度的丹酚酸B均可明显增加6Ket

7、oPGF1的分泌，与PDTC组和正常对照组无显著性差异;其中以低浓度的丹酚酸B作用较好。见表2。表1各组细胞上清液NO、EF1含量与正常对照组比较：1)P0.05，2)P0.01,3)P0.001;与模型组比较：4)P0.05，5)P0.01,6)P0.001表2各组TXB2、6KetoPGF1α含量与正常对照组比较：1)P0.01,2)P0.001;与模型组比较：3)P0.01,4)P0.0013讨论内皮细胞是体内代谢十分活跃的内分泌细胞，分布于全身各组织。血管内皮细胞产生和释放的血管舒张因子常见有NO、PGI2，收缩因子有ET

8、1、TXA2、前列腺素H2等，正常血管内皮细胞具有调节血管舒缩、平滑肌增殖、血小板聚集、溶凝血和促进新生血管生长功能。AS时存在血流介导的内皮功能障碍，导致血管舒缩因子分泌失调，从而使内皮依