DNA重组技术的基本工具 学习目标： 1、了解基因工程的概念

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1、DNA重组技术的基本工具学习目标：1、了解基因工程的概念2、理解基因工程中三种基本工具的作用3、模拟将目的基因拼接到载体上的操作过程，说出其基本原理山观高级中学徐巧振基因工程，又叫DNA重组技术。是指按照人们的愿望，在DNA分子水平上进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程的概念目的基因的获取目的基因与运载体结合（基因表达载体的构建）将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与表达基因工程一般操作步骤基因工程需要哪些特殊工具？分子手术刀——限制性核酸内切酶分子针线——DNA连接酶分子运输车

2、——载体限制性核酸内切酶的来源限制酶从哪里寻找？限制性核酸内切酶的特点及作用每种限制性核酸内切酶只能识别特定的核苷酸序列，并在特定位点上切割DNA分子。——特异性EcoRⅠ限制酶黏性末端：被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。黏性末端SmaⅠ限制酶平末端　　　平末端在实际操作过程中：限制性核酸内切酶是如何发挥作用的？磷酸二酯键DNA连接酶的特点和作用将两个相同的黏性末端之间连接起来，即恢复被限制性核酸内切酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。——无特异性DNA连接酶的种类自学思考：1、DNA连接酶根据来源可以分为哪

3、两类？2、这两类DNA连接酶作用有什么差别？可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·coliDNA连接酶　　　　　　　　或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低比较DNA连接酶DNA聚合酶不同点连接的DNA链链模板连接的对象相同点作用实质形成键单双不要要2个DNA片段单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上磷酸二酯基因进入受体细胞的载体：分子运输车学生探究：具备哪些条件才能充当“分子运输车”？讨论提示：1、外源DNA片段怎样才能插入载体呢？2、插入载体

4、的DNA片段怎样才能确保自己在受体细胞分裂时不被丢失从而稳定地存在于子细胞内？3、目的基因是否进入受体细胞，我们能够用肉眼观察吗？如果不能，那如何判断？4、如果我们选用霍乱弧菌的质粒作为运载体可以吗？为什么？⑴有一或多个限制酶切点⑵有一个或多个标记基因，便于筛选⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达⑷对受体细胞无害载体的特点和作用运载体：质粒、噬菌体以及一些动植物病毒学生活动：重组DNA分子的模拟操作目的：模拟将目的基因拼接到载体上的操作过程，说出其基本原理具体操作步骤参看书本P6页的模拟操作过程。基因工程三工具分子手术刀限制酶分子缝合针DNA连接酶分子运输车质粒、病毒等基因工程

5、的原理小结基因的“剪刀”基因的“针线”基因的运载体1.基因工程的正确操作步骤是（）①使目的基因与运载体结合③检测与表达②将目的基因导入受体细胞④提取目的基因A.③②④①B.②④①③C.④①②③D.③④①②C2.以下说法正确的是()A.目的基因是指重组DNAB.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列C.DNA重组所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体D.只要受体细胞中含有目的基因，目的基因就一定能成功表达B小试牛刀4.(多选题)科学家运用基因工程技术,让羊合成并分泌抗体,相关叙述中正确的是()A.该技术导致生物定向变异B.DNA连接酶把目的基因与运载体黏性末端碱基对连接起来C.

6、蛋白质中的氨基酸序列可为合成目的基因提供材料D.受精卵是理想的受体ACD3.下列是由限制酶切割形成的DNA片段，能用相应DNA连接酶将它们恢复连接的组合是（）①…CTGCA…G②…G…CTTAA③…G…ACGTC④AATTC…G…A.①③；②④B.①②；③④C.①④；②③D.以上都不对A小试牛刀5.如图，就下列与核酸相关酶的作用机理填空：①限制酶②解旋酶③DNA连接酶④DNA聚合酶⑤RNA聚合酶baA.切断a处的酶为_______B.连接a处的酶为_______C.切断b处的酶为_______①③④②小试牛刀