载脂蛋白e基因启动子多态性与年龄相关性黄斑变性的关系

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1、载脂蛋白E基因启动子多态性与年龄相关性黄斑变性的关系【摘要】目的：探讨载脂蛋白E(APOE)基因启动子(_219G/T)多态性与年龄相关性黄斑变性(AMD)发病危险性的关系。方法：用聚合酶链反应_限制性片断长度多态性分析法对AMD组(50例)和对照组(95例)的APOE_219G/T基因型做出鉴定。结果：两组间不存在_219G/T基因型频率分布的差异(P>039)。结论：APOE基因_219G/T多态性与AMD发病危险性无关。【关键词】年龄相关性黄斑变性载脂蛋白E多态性RelationshipbetoterPolymorphismsandtheRiskofAge_relate

2、dMacularDegenerationSHAOYun_liang1，QINYan_li1，YIXiao_guang1，SONGYue1，YANYi_nong2（1STU/CUHKJointShantouInternationalEyeCenter，Shantou515041，China;2ZhanjiangALLADEyeCenter，Zhanjiang524043，China）［Abstract］Objective:Tostudytherelationshipbetoter(_219G/T)polymorphismsandtheriskofage_relatedmacularde

3、generation(AMD).Methods:APOE_219G/TgeypeinAMDgroup(50cases)andcontrolgroup(95persons)erasechainreactionandrestrictionfragmentlengthpolymorphismgenotypingtechnique.Results:NosignificantdifferenceorphismsdonotcontributetoAMDrisk.［KeyD)是导致老年人视力严重损害甚至失明的一种常见疾病，病理学研究发现它的发生与异常脂肪代谢及转运相关。遗传学的研究证实它的发生与载

4、脂蛋白E(APOE)基因密切相关［1，2］。APOE蛋白是神经系统重要的转运蛋白，APOE基因及基因启动子(_219G/T)具有多态性,启动子的突变显著降低APOE基因的表达并进而影响APOE蛋白的功能［3，4］。目前还未见有关APOE基因启动子多态性与AMD发病危险性关系的报道，本研究旨在用聚合酶链反应_限制性片段长度多态性(PCR_RFLP)分析法探讨APOE基因启动子多态性与AMD发生危险性的关系。1资料与方法11一般资料根据AMD诊断标准［5］选取AMD50例(AMD组，男性22例，女性28例。年龄最小55岁，最大78岁，平均65岁)和对照组95例(来自排除眼底病的白内障患

5、者及其他眼科患者。男性45例，女性50例。年龄最小58岁，最大82岁，平均68岁)。12方法抽两组空腹静脉血3mL，-80℃冻存。用DNA试剂盒(QIAampDNAminikits)从200μL血中提取DNA。用引物(正向：5′_AGAATGGAGGAGGGTGTCCG_3′，反向：5′_ACTTGTCCAATTATAGGGCTCC_3′)扩增包括_219G/T位点的目标DNA片段，PCR反应条件：变性温度94℃，40s，退火温度58℃，60s，延伸温度72℃，40s共35个循环。用NadⅡ酶对包含_219G/T位点碱基片段进行酶切，温度37℃，时间3h。用质量分数12%的聚丙烯酰

6、胺凝胶(PAGE)对酶切产物进行电泳，电压250mV，时间40min。溴乙啶染色凝胶5min，紫外线灯下观察并拍照。2结果两组间不存在APOE基因_219G/T基因型频率分布的差异(χ2=185，df=2，P>039)(表1)。两组PCR_RFLP检测结果见图1。表1两组APOE基因_219G/T多态性分布3讨论AMD是涉及视细胞、视网膜色素上皮细胞、脉络膜的一种疾病。弥散性drusen、软性drusen、脉络膜新生血管、盘状瘢痕是AMD的4个病理特征［6］。临床上Drusen被看作是AMD发展的一种风险因子，用组织化学的方法也证实drusen中有磷脂和中性脂肪的存在。AP

7、OE基因位于19q132，含4个外显子和3个内含子，共有3个(ε2、ε3和ε4)等位基因，并由此产生6种基因型。APOE是含有299个氨基酸的磷脂糖蛋白,是组成脂蛋白的重要成分，其在调节脂质代谢、维持胆固醇平衡方面起着重要作用，同时也参与神经系统的正常生长和损伤后的修复过程。研究显示，不同APOE基因型与AMD发生危险性之间密切相关，APOE基因的ε2对AMD发生有促进作用,而ε4对AMD发生有保护作用［1，2］。研究还发现APOE基因启动子的3个(_4