龈下刮治前后不同牙周状态龈下菌斑中hcmv病毒的检测

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1、龈下刮治前后不同牙周状态龈下菌斑中HCMV病毒的检测【摘要】目的探讨人类巨细胞病毒（HCMV）感染与慢性牙周炎（CP）病变程度的关系，及龈下刮治对巨细胞病毒的表达影响。方法采用PCR方法检测45例CP患者龈下刮治前后其牙龈炎部位、牙周炎活动部位和牙周炎静止部位的HCMV检出率。结果龈下刮治前牙龈炎部位、牙周炎静止部位和活动部位HCMV的感染率分别为17%（17/100）、19.32%(17/88)和37.5%(42/112)，牙周炎活动部位的HCMV阳性率明显多于牙周炎静止部位和轻度龈炎部位（P<0.01）。龈下刮治后1周，HCMV阳性率明显下降，4周

2、后又恢复到基线水准。结论HCMV感染与CP特别是牙周炎的活动性有密切关系。龈下刮治不能长期有效地抑制HCMV病毒的表达。【关键词】巨细胞病毒巨细胞病毒感染慢性病牙周炎牙龈下刮治术慢性牙周炎(chronicperiodontitisCP)是一种口腔常见的感染性疾病，但其发病机制至今尚未完全阐明。细菌被认为是牙周炎最主要的致病因素,但细菌致病学说并不能很好地解释牙周病的部位特异性以及间断爆发性[1]。近年来，各种PCR技术成为病毒核酸检测的特异、敏感的方法，为研究病毒在牙周病发病中的作用提供了帮助。初步研究表明人类巨细胞病毒（humancytomegalovir

3、us，HCMV）可能与局限性青少年牙周炎、急性坏死溃疡性龈炎的发生具有相关性[24]。本研究采用PCR方法检测CP患者不同牙周状态及这些位点经常规的牙周刮治前后HCMV的检出率，探讨HCMV病毒与CP的相关性。1对象与方法1.1对象病例选自2004年1月～2005年1月门诊就诊的初诊病人。病例的纳入标准为：（1）被临床诊断为牙周病患者，CP活动部位的判断标准为：牙周袋深度（pocketdepth，PD）≥5mm，附着丧失(attachmentloss，AL)≥2mm，探诊出血为阳性，牙龈指数≥2。CP静止部位的判断标准为：PD≥5mm，AL≥2mm，探诊出

4、血为阴性，牙龈指数0～1。诊断牙龈炎的标准是患者牙龈变红、水肿或出血，但无AL，X线检查无牙槽骨的吸收[1]。（2）就诊前3个月未作牙周治疗。（3）全身健康，无糖尿病、心血管等系统性疾病，近1个月内未服用抗菌素，妇女未妊娠。（4）口内的余牙≥20个。本组符合条件的CP患者45例，男性21例，女性24例，年龄（44±8.62）岁（25～72岁）。1.2方法1.2.1标本采集采样牙用消毒棉球将牙齿的龈上菌斑去除，吹干、棉卷隔湿，每个位点用3根消毒的纸尖插入牙周袋底30s，放入装有200μLTE缓冲液EP管内，转移置于-70℃保存。每位牙周炎患者均分别采取4个牙（

5、前后牙各2颗）的近中和（或）远中牙周袋位点，记录每个采样位点的牙周袋的深度和牙龈指数，同时采用超声和手工器械进行常规的牙周刮治和根面平整，1周及4周后再次复诊采集同一位点的标本。1.2.2DNA提取采用中山医科大学达安基因股份有限公司提供的病毒DNA提纯试剂盒制备上述患者标本中的DNA，采用加热煮沸法，具体步骤见试剂盒说明书，取2μL上清液作PCR反应。1.2.3HCMV检测采用中山医科大学达安基因股份有限公司提供的巨细胞病毒核酸扩增PCR荧光检测试剂盒进行检测。具体步骤如下：取待测样品和HCMV阳性、阴性标准品各2μL加入专用毛细管中,8000r/min离

6、心2min，倒置10s后，放入全自动荧光PCR扩增仪（RocheLighterCycler2.0,瑞士），设置PCR扩增反应循环参数为：预变性2min→93℃45s→55℃45s，做40个循环。反应结束后，调整荧光记数值，读取仪器自动分析结果。40个循环内凡是出现典型的扩增荧光曲线者为阳性，未出现扩增荧光曲线为阴性。1.3统计学处理检出率采用χ2检验。2结果对45名CP患者牙周刮治前牙周炎活动部位、牙周炎静止部位和轻度龈炎部位共300个位点进行HCMV检测，阳性率分别为17％(17/100)、19.32％(17/88)和37.5%(42/112)；刮治后1周

7、和4周时，再次对刮治前17个HCMV阳性的牙龈炎部位与17个HCMV阳性的牙周炎静止部位及42个HCMV阳性的牙周炎活动部位进行检测（表1）。结果表明，刮治后1周HCMV阳性例数明显减少，但4周后又基本恢复到基线水平，即龈下刮治和根面平整对龈下菌斑中病毒的表达没有长久的影响效果。表145例慢性牙周炎患者龈下刮治前后不同牙周位点的人巨细胞病毒检出率3讨论病毒是细胞的专性寄生物，可以直接破坏细胞，并且感染病毒后，可无症状地长期携带，在一定条件下爆发，引起症状，急性期过后又可以潜伏。病毒潜伏与复发的模式与牙周病有静止期和活动期、间断爆发有相似性，因而受到学者的关注

8、[56]。HCMV作为人类疱疹病毒的一种，普遍寄生