罗布麻叶顶空气相色谱—质谱指纹图谱的研究论文

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1、罗布麻叶顶空气相色谱—质谱指纹图谱的研究论文相淞华,宋建平,刘训红,张月婵【摘要】【目的】建立罗布麻叶挥发性成分顶空气相色谱—质谱（HSGCMS）指纹图谱分析方法,评价不同产地罗布麻叶药材的质量。【方法】采用HSGCMS联用技术对不同产地罗布麻叶的挥发性成分进行分析,测定其指纹图谱,确定共有指纹峰,并作模糊聚类分析和相似度评价。【结果】罗布麻叶挥发性成分中含有14个特征性指标成分,初步建立了以此14个共有峰为特征指纹信息的HSGCMS指纹图谱。【结论】本方法准确可靠,重复性好,可作为罗布麻叶质量评价的依据。【关键词】罗布麻叶/化学；挥发性成分/分析；指纹图谱罗布麻叶为《中国药典》收载的常

2、用中药,系夹竹桃科植物罗布麻ApocynumveomL.的干燥叶,具有平肝安神、清热利水之功效［1］。现代用于治疗高血压、高血脂、冠心病、哮喘、气管炎等疾病有较好的效果［2］。罗布麻叶挥发性成分为主要活性成分之一,.freelveomL.的叶。留样凭证存放于南京中医药大学中药鉴定实验室。2方法与结果2.1分析条件2.1.1色谱条件色谱柱：HP5MS(涂布浓度为5%的苯甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱,30.0m×250μm×0.25μm)；进样口温度：180℃；程序升温：50℃保持20min,以4℃/min的速率升至200℃,保持5min；载气：He气,流量：1.0mL/min,分流比15∶1。

3、2.1.2质谱条件电离方式：电子轰击离子源(EI)；离子源温度：230℃,四级杆温度：150℃,接口温度：280℃；电子倍增器电压：1329.4V；电子能量:70eV；扫描范围：45.0~650.0aum。2.2顶空供试品制备通过对药材粉碎粒度、体积装样量、顶空加热温度及顶空加热时间进行考察,确定罗布麻叶挥发性成分优化的顶空条件：取罗布麻叶粉末(过40目筛)3g,精密称定,置顶空瓶中,密封,放入顶空进样器,120℃加热平衡30min,供测试。2.3方法学考察2.3.12h记录图取罗布麻叶挥发性成分进样分析,结果表明：60～120min无出峰,提示50min内挥发性成分出峰完全。2.3.2精密度

4、试验取罗布麻叶(S2)挥发性成分进行分析,连续进样5次。结果表明：14个指标成分群保留时间的相对标准偏差均小于0.21%,相对含量的相对标准偏差均小于5%,提示仪器精密度良好。2.3.3稳定性试验取罗布麻叶(S2)挥发性成分进行分析,分别在1、3、6、24、48、120h进样6次,得14个主要特征峰保留时间、相对含量。结果表明：14个指标成分群保留时间相对标准偏差均小于0.29%,相对含量的相对标准偏差均小于5%,提示120h内样品(溶液)稳定性较好。2.3.4重复性试验取同一批次罗布麻叶(S2)5份,提取挥发性成分后分别进样分析,得14个主要特征峰的保留时间和相对含量。结果表明：14个指标成

5、分群保留时间的相对标准偏差为0%～1.37%,相对含量的相对标准偏差为1.83%～5.15%,说明重复性较好。2.4指纹图谱建立样品按选定的顶空条件及分析条件进行分析,测得所有供试品的气相色谱—质谱（GCMS）总离子流图；再对总离子流图中的各峰经质谱扫描后得质谱图,所有组分质谱数据经计算机处理和NIST05标准质谱图库检索鉴定,并与有关标准谱图核对,初步确定出罗布麻叶挥发性成分中53种化合物。根据罗布麻叶挥发性成分HSGCMS总离子流图所给出的峰数高、峰保留时间和峰面积值等相关参数以及成分鉴定结果,进行分析、比较,制定HSGCMS指纹图谱(图1，见彩图页第666页)。2.5指纹图谱分析2

6、.5.1共有指纹峰的标定经对挥发性成分GCMS总离子流图的分析、比较,罗布麻叶标定14个共有峰作为指纹图谱的特征峰,1～14号峰化学成分依次为：2戊烯1醇、未鉴定、1,2,5,5四甲基1,3环戊二烯、3,5二甲基苯酚、安息香醛、2戊基呋喃、顺式氧化芳樟醇、2,6二甲基环己醇、薄荷酮、藏红花醛、β环柠檬醛、胡薄荷酮、大马酮、5,6,7,7A四氢4,4,7a三甲基(4H)苯呋喃酮。以2戊基呋喃(6号峰)为参照峰,分别求出各共有峰与之相比的α值(调整保留时间之比)和各共有峰的相对峰面积(峰面积之比)，见表1。表1罗布麻叶挥发性成分中共有峰的相对保留时间α值和相对峰面积（

7、略）2.5.2指纹图谱的聚类分析选择罗布麻叶挥发性成分中14个比较明显的共有峰,根据表1中的数据,采用SPSS15.0软件中的hierarchicalclusteranalysis对12个罗布麻叶样品进行聚类分析,所用聚类方法为averagelinkage(betin的峰高较高,故样品加热平衡时间选择30min。不同产地罗布麻叶中均含有2戊烯1醇、未鉴定、1,2,5,5四甲基1,3环戊二