肝癌组织survivin的表达与凋亡，增殖和p53的关系论文

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1、肝癌组织survivin的表达与凋亡，增殖和p53的关系论文惠文涛，南克俊，阮之平，景昭，张群领【关键词】肝肿瘤Relationshipsbeta【Abstract】AIM:Toinvestigatetheexpressionofsurvivinproteinanditsrelationshiparyhepatocellularcarcinoma(HCC).METHODS:Theexpressionsofsurvivin,p53andproliferatingcellnuclearantigen(PA)in42cancertissues,34ajacentcirrhosi

2、stissuesand10normaltissuesmunohistochemicalmethodandapoptosisethod.RESULTS:Survivinproteinaltissues.SurvivinproteinpositiveexpressionrateinHCCaltissues(P0.001).Theincreasedsurvivinproteinexpressionincancere(P=0.002)andtheratioofproliferativeindextoapoptoticindex(P=0.001),butorsize,clinica

3、lstageandlocalmetastasis(P0.05).CONCLUSION:ThereisamarkedincreasedsurvivinexpressioninHCC,ayplayanimportantroleinbreakingthebalancebetaypromotep53negativeHCCcellstoobtainanantiapoptosisability,therebypromotingthedevelopmentofHCCandpartlyplayingaroleinthefurthermalignanttransitionoftumorce

4、lls.【Keys;apoptosis;proliferatingcellnuclearantigen;genes,.freelm者17例，＞50mm者25例；门脉癌栓阳性者14例算作局部转移，阴性者28例算作局部无转移，所有患者术前均未经过化疗和放疗.Edmondson病理Ⅰ~Ⅱ级36例，Ⅲ~Ⅳ级6例；TNM临床Ⅰ~Ⅱ期12例，Ⅲ~Ⅳ期30例.标本用40g/L甲醛固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片.同期健康成年男性HE染色病理诊断正常肝脏组织标本10例（经家属同意）为对照组.鼠抗人survivinmAb（4F7）购自美国Neomarker公司；免疫组化Elivision二

5、步法检测试剂盒（即用型）购自福州迈新生物技术开发公司；鼠抗人PAmAb（pc10），鼠抗人p53mAb（MAB0226，突变型）购自北京中山生物技术有限公司；原位细胞凋亡检测试剂盒购自德国Roche公司.1.2方法1.2.1Survivin,PA和p53表达应用免疫组化（Elivision两步法）染色，切片常规脱蜡至水，置于pH6.0的柠檬酸缓冲液行微波修复15min，置冷，30mL/L过氧化氢阻断内源性过氧化物酶20min，羊血清封闭37℃20min，滴加survivin（1∶100）,p53（1∶50）,PA（1∶50）一抗，置37℃恒温箱2h，分别滴加两步法试剂盒中

6、的A液和B液各50μL分别室温孵育40min,DAB显色，苏木素复染，盐酸乙醇分化，脱水透明后中性树胶封片，光镜下观察阳性细胞并按阳性标准计数.以试剂公司提供的阳性对照片作为阳性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照.survivin染色定位于胞质，呈棕黄色，切片根据阳性细胞百分率分为：阳性（+），随机计数5个视野，计算每个视野阳性细胞率，取平均值，如大于10%则为阳性；阴性（-）没有或仅有弱的染色，阳性细胞率10%.P53染色定位于胞核，呈棕黄色，阳性判断标准同survivin.PA染色以胞核染成棕黄色为阳性，增殖活性以PA标记指数（PALI）代表，随机计数500个细

7、胞中阳性细胞数，PALI=（阳性细胞数/细胞总数）×100%.1.2.2HCC凋亡检测经多聚赖氨酸处理的组织切片同免疫组化法脱蜡至水.微波热修复处理15min，将凋亡检测试剂盒中试剂1与试剂2按1∶9混合为TUNEL反应液.取反应液50μL滴加到组织上，置37℃恒温箱孵育1h；滴加试剂3液50μL37℃孵育40min；滴加BCIP/NBT显色15~30min；核固红衬染5~10min，自来水冲洗5min；梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片.肝癌组织中TUNEL阳性信号（即凋亡细胞）呈现为蓝紫色颗粒，位于细胞核，核浓缩呈小圆