双缩脲法快速测定蛋白质含量

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1、双缩脲法快速测定蛋白质含量【摘要】　　研究了双缩脲法测定蛋白质含量过程中温度及碱性因素对结果的影响，将定量标准曲线固定下来，可达到快速检测的目的。【关键词】双缩脲法　蛋白质含量　　人造血浆是明胶制成的血浆替代品，常用双缩脲法［1］对其蛋白含量定量分析。通过实验证明实验室温度对此方法结果没有明显影响，而在此方法中双缩脲试剂碱性强度对实验结果影响较大。我们找到了一种合适的碱性强度，作出了稳定的标准曲线，使检测速度大大提高。　　1材料与方法　　1.1仪器紫外可见分光光度计(日本岛津，UV160)；分析天平(日本岛津，AEG220G)。

2、　　1.2试剂人造血浆(沈阳贝朗制药有限公司)；柠檬酸C6H8O7·H2O(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)；硫酸铜CUSO4·5H2O(鑫科股份合肥工业大学化学试剂厂，分析纯)；氢氧化钠NaOH(国药集团化学试剂有限公司，分析纯)；氯化钠(天津市天河化学试剂厂，分析纯)。　　1.3溶液配制　　1.3.1CUSO4·5H2O溶液　　取40.0g柠檬酸C6H8O7·H2O和4.0g硫酸铜CUSO4·5H2O加蒸馏水300ml搅拌溶解后定容至500ml。　　1.3.2NaOH(2M)溶液　　取NaOH40.0g，加蒸馏水300ml搅

3、拌溶解冷却后定容至500ml。　　1.3.3NaOH(4M)溶液　　取NaOH80.0g，加蒸馏水300ml搅拌溶解冷却后定容至500ml。　　1.4试验方法　　1.4.1温度对结果的影响　　①双缩脲溶液制备：取1.3.1溶液50ml加入50ml1.3.2溶液混匀放置冷却至室温。②取人造血浆(蛋白含量40.0g/L)0.75ml、1.0ml、1.25ml、1.5ml分别置于20ml容量瓶中，加入双缩脲溶液10ml，用0.9%NaCl溶液定容至刻度，摇匀后在20℃水浴放置10min，用紫外可见分光光度计在520～600mn进行扫描，

4、取最大峰值作为结果。在30℃、40℃重复上述试验，结果见表1、图1。表1温度对结果的影响（略）　　1.4.2碱性因素对结果的影响　　①双缩脲溶液制备：取1.3.2溶液8ml、9ml、10ml、11ml、12ml分别加入1.3.1溶液10ml混匀放置冷却至室温。②分别取人造血浆(蛋白含量40.0g/L)1.0ml置于20ml容量瓶中，分别加入上述双缩脲溶液10ml，用0.9%NaCl溶液定容至刻度，摇匀后放置10min，用紫外可见分光光度计在520～600mn进行扫描，取最大峰值作为结果。结果见表2、图2。表2碱性因素对结果的影响（

5、略）注：A为520～600mn最大吸收值。　　　　1.4.3合适的碱性强度　　重复1.4.2只是把1.3.2溶液换成1.3.3溶液，所得结果见表3、图3。表3碱性强度（略）　　1.4.4标准曲线的确定　　以确定蛋白含量人造血浆(蛋白含量40.0g/L)为标准品，取0.75ml、1.0ml、1.25ml、1.5ml做标准曲线，结果见图4。　　2结果　　2.1温度对结果的影响显然实验室温度对此方法的结果没有明显影响。　　2.2碱性因素对结果的影响实验结果显示碱性强度对此方法影响较大。　　2.3合适的碱性强度实验结果表明当NaOH溶液浓

6、度在4M左右时碱性强度微弱的变化对此方法结果无影响。　　2.4标准曲线的确定　　3小结利用本研究方法可以提高蛋白质含量测定的速度，因为在检测过程中省去了确定标准曲线的时间。本方法对蛋白质类药品生产过程中的含量控制具有实际的意义。【参考