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时间：2020-08-29
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1、实验三 双缩脲法测定 蛋白质含量原理蛋白质含有两个以上的肽键，因此，有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与Cu2＋形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量和氨基酸成份无关。在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540～560nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线，求出未知样品的蛋白质浓度，注意1、除－CONH-有此反应外——CONH2，-CH2-NH2，-CS-NH2等基团亦有此反应。2、双缩脲法常用于蛋白质的快速测定。3、低浓度的铵盐不干扰结果
2、；Tris及含氨基酸、多肽的缓冲被．以及蔗糖、甘油等干扰本实验。4、反应完后，放置30min；灵敏度低1～20mgTris:三羟甲基氨基甲烷盐酸盐操作123标准酪蛋白（ml）样品（ml）H2O(ml)双缩脲试剂（ml）—1.0———1.02.01.01.04.04.04.0室温放置30分钟，于540nm处比色郎伯-比尔定律1、公式描述2、注意：当A值在0.2~0.7之间或者T值在65~20%之间，相对误差较小。课后练习1、记忆五种蛋白质浓度测定方法的优缺点、灵敏度和原理。2、双缩脲法显色的颜色是什么?3
3、、使用紫外－可见分光光度计时，测定A值应当在什么范围内比较合理？为什么？在pH=7的水中加入一种纯的蛋白质，形成蛋白质溶液后测定其pH为5.3，请问这种蛋白质的等电点(pI)在什么样的范围？
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