氯化两面针碱的体内抑瘤作用及机制论文

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1、氯化两面针碱的体内抑瘤作用及机制论文【摘要】目的研究氯化两面针碱对S180荷瘤小鼠的的抗肿瘤作用及机制。方法以荷瘤小鼠实体瘤瘤重为实验指标评价氯化两面针碱对S180移植性肉瘤的抑制作用，免疫组织化学方法检测肿瘤组织中的p53、Bcl-2和Bax蛋白。结果氯化两面针碱2.5，5和10mg·kg-1剂量对S180肉瘤生长的抑制率分别为1.95%，27.3%和42.9%，p53、bcl-2蛋白的表达率明显低于对照组，bax蛋白表达率高于对照组。结论氯化两面针碱对小鼠S180肉瘤有抑制作用，其机制可能与影响癌基因的表达有关。【关键词】两面针氯化两面针碱抗肿瘤中药Abst

2、ract：ObjectiveToinvestigatetheanti-tumoreffectofNitidinechlorideinvivoonSara180（Sl80）miceanditsmechanism.MethodsTheantitumoreffectofNitidinechlorideormunohistochemistry.ResultsNitidinechloridesignificantlyinhibitedthegroor,theinhibitoryrateatthedoseof2.5，5.freelg·kg-1oreffectinvivo,a

3、nditsinfluenceononcogenemaybeoneofitsanti-tumormechanism.Keynitidum(Roxb.)DC;Nitidinechloride;Anti-tumor;TraditionalChinesemedicine氯化两面针碱（NitidineChloride）是从广西特有药用植物两面针Zanthoxylumnitidum(Roxb)DC的根中分离到的具有抗肿瘤活性的生物碱，据文献［1］报道，对LE期阻滞，并诱导细胞凋亡。为较系统地研究氯化两面针碱的抗肿瘤活性，本实验采用小鼠移植性肉瘤S180模型，评价氯化两面针碱

4、的体内抗肿瘤活性，并研究氯化两面针碱对原癌基因和抑癌基因的影响，探讨其可能的作用机制，为氯化两面针碱的进一步研究及开发利用提供依据。1材料与仪器1.1试剂和仪器氯化两面针碱由广西中医药研究所分离提纯（纯度＞95%），阳性对照药环磷酰胺（CTX）购自江苏恒瑞医药股份有限公司（批号07010821）；BCL-2，Bax，p53兔抗小鼠多克隆抗体购自SANTACRUZBIOTECHNOLOGY公司：即用型二步法（非生物素）PV6001兔二步法检测试剂盒、DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司；超净工作台：苏州净化设备厂；病理组织切片机、病理图像分析仪：德国L

5、eica公司。1.2动物昆明小鼠，SPF级，雌雄各半，体重（20±2）g，由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（桂）2003-0003。小鼠S180肉瘤荷瘤鼠购自广西中医药研究所，由本实验室接种保存。2方法2.1小鼠S180肉瘤造模方法及检测指标从S180传代小鼠腹腔抽取乳白色瘤液以生理盐水稀释，调节细胞密度为1×1010·L-1。台朌蓝染色，镜检细胞存活率≥95%。取待接种小鼠消毒腋下皮肤，于超净工作台上将瘤细胞悬液以每只0.2ml接种于小鼠右侧腋窝皮下，30min内接种完毕。接种完成小鼠于动物房饲养，自由摄食饮水。接种24h后开始给药，分别

6、设对照组（腹腔注射生理盐水），氯化两面针碱高、中、低剂量组（分别腹腔注射氯化两面针碱10，5，2.5mg·kg-1），CTX组（腹腔注射CTX20mg·kg-1），每组10只，1次/d。给药10d结束后，次日处死全部动物，剥离瘤块，生理盐水冲洗，滤纸吸干后称重。计算肿瘤生长抑制率：抑瘤率（%）=（对照组平均瘤重-实验组平均瘤重）/对照组平均瘤重×100%。2.2光镜观察取各组S180小鼠的瘤体，用中性福尔马林固定，取材，常规石蜡包埋切片，HE染色。普通光学显微镜下分别观察以下指标：①瘤细胞生长情况；②瘤组织浸润程度；③核分裂数；④血管数目；⑤坏死程度。2.3免疫

7、组织化学法剥离的瘤组织用中性福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，按试剂盒说明进行染色，用PBS代替一抗做阴性对照。结果判定：每批染色阳性对照片应显示为阳性，阴性对照片应显示为阴性，否则整批片重染。免疫组化染色半定量分析