当归补血汤血清抑制人肝癌细胞smmc论文

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1、当归补血汤血清抑制人肝癌细胞SMMC论文李军昌，赵建斌，刘颖格，成晓娟，马世平，王文，郑谨，夏天【关键词】肝肿瘤【Abstract】AIM:ToobservetheeffectsoftheserumofDangGuiBuXueDecoction(DGBXD)ontheproliferationofSMMC7721.METHODS:25rabbitsandtherabbitsseraofdifferenttimepointsLofNaltriichlorcid(9gL-1)orDGBXDediumofhum

2、anheptocarinomacelllinesofSMMC7721edependentmanner.TmaxinafterigandthemaximumeffectsofBGBXDanlivercancerSMMC7721inadoseandtimedependentmanner.【Keys;DangguiBuXuedecoction;MTT【摘要】目的：观察当归补血汤血清对SMMC7721增殖影响的量效和时效关系.方法：采用纯种新西兰雄兔25只.freelL的32,16,8和4gkg-1当归补血汤和生

3、理盐水灌胃，于不同时间点收集血清，以MTT法测定上述血清对人肝癌细胞系SMMC7721增殖抑制作用.结果：当归补血汤血清对人肝癌细胞SMMC7721增殖有抑制作用，且具有时间和剂量依赖性，灌胃后45min抑制作用最强，各组抑制强度分别为0.46±0.05(32gkg-1,.freelLL-1牛血清，青霉素10kUL-1的PRMI1640培养液中，在37℃，50mLL-1CO2充分温度条件下的细胞培养箱培养，3~4d后以2.5gL-1胰蛋白酶消化后，吹打后以4×107L-1传代1次.取对数生长期的细胞用于实

4、验.当归补血汤由5∶1的黄芪、当归，放入不锈钢锅内，加6倍水，文火煮沸25min，以三层纱布过滤，第2次沸水覆盖药渣，文火煮25min过滤后，两次溶液合并，3000rmin-1离心20min，取上清浓缩至含生药1.5kgL-1，置4℃冰箱备用.雄性新西兰大白兔25只，（第四军医大学实验动物中心提供），体质量（2.0±0.1）kg，随机分五组，灌胃前禁食12h，禁饮4h，以200gL-1乌拉坦1.0gkg-1行静脉麻醉，分离并留置颈动脉导管，分别给予32，16，8和4gkg-1当归补血汤以生理盐水稀释至50

5、mL的液体及生理盐水50mL灌胃，于灌胃即刻及灌胃后5,10,30,45,60,90,120,180和240min由颈动脉导管无菌采血,分离血清，经56℃30min灭活处理，以0.45μm的微孔滤膜过滤除菌，置-20℃保存备用.1．2方法将以4×107L-1传代处于对数生长期的SMMC7721的细胞进行消化,以无血清PRMI1640冲洗3次，以2×107L-1接种于96孔细胞培养板中，分别加入小牛血清及不同时间点的兔血清各150μL，各组设6个平行孔，按文献［1］培养68h后加入MTT(5gL-1)10μ

6、L,继续孵养4h，吸弃培养上清，加入DMSO100μL，振荡15min，以酶联免疫检测仪在570nm下测定吸光度A.细胞生长抑制率=(对照组A平均值-实验组A平均值)/对照组A平均值×100%.统计学处理：应用SPSS10.0软件进行Probit回归分析以及方差分析与Duntt检验.2结果当归补血汤可一定程度地抑制人肝癌细胞SMMC7721增殖，且有时间依赖性，与对照组比较，32gkg-1灌胃后,30,45,60和90min均有明显抑制肿瘤细胞增长作用，所测值分别为0.49±0.01(P0.01)；0.4

7、6±0.05(P0.01)；0.48±0.07(P0.01)；0.50±0.06（P0.01）；达峰时间位于服药后45min附近，分别服32,16和8gkg-1均有显著抑制生长作用（P0.05,Tab1），其抑制强度分别为28.1%，18.4%和11.4%.呈剂量依赖性（P0.01），