大鼠脑出血后mmp9对血管生成影响论文

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1、大鼠脑出血后MMP9对血管生成影响论文方李鸿娄季宇白宏英曾志磊仲玉洁刘海涛郭耀强【摘要】目的探讨脑出血后MMP9对血管生成的影响。方法采用立体定向技术作大鼠脑出血模型，用免疫组化方法测定脑出血后CD34阳性新生微血管及MMP9表达。结果MMP9阳性区平均灰度值高CD34阳性新生血管较多。结论脑出血后MMP9可能是促血管生成因子，强力霉素能通过调节MMP9的表达与活性影响血管生成。【关键词】脑出血；血管生成；强力霉素；MMP9；CD34【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectofMMP9inangiogenesisaftercerebralhemo

2、rrhage.MethodsMP9andthesituationofCD34masculineneicrovesselsmunohistochemistryafterICHberofCD34masculinevesselsaybethefactortopromotetheangiogenesisaftercerebralhemorrhageanddoxycyclingcanaffecttheangiogenesisbyadjustingtheexpressionandactivityofMMP9.【Keyorrhage；Angiogenesis；Doxycycline；CD34；MM

3、P9MMP9（matrixmetalloproteinase9,MMP9）是作用于血管内皮细胞基质的主要成分Ⅳ型胶原蛋白酶，以往研究认为它是血管损伤因子参与脑水肿的发生发展，但体外研究发现MMP9与血管平滑肌的增值、迁移有关［12］；此外，最新研究发现MMP9表达上调可促进乳腺癌新生血管的形成［3］。本研究尝试用广谱基质蛋白酶抑制剂强力霉素干预，观察不同时间点MMP9表达及CD34阳性新生微血管，探讨MMP9在大鼠脑出血后血管生成中的作用。1材料和方法1.1材料（1）实验动物：雌性SD大鼠48只由郑州大学动物中心提供.freelg/100g动物体质量）后固定在立体定位仪上，

4、备皮消毒后暴露颅骨在前囟向前0.2mm矢状缝向左旁开3mm，用牙科钻钻开颅骨不伤及硬脑膜，再用100μl微量进样器抽取80μl的自体未凝动脉血（对照组注入等量生理盐水），从已钻孔垂直进针6mm（相当于尾状核）缓慢注入后保留10min拔出，缝合切口；模型造成后用Longa评分达到1分入选；生理盐水（剂量1.2ml/100g动物体质量）灌胃1次/d；干预组第5天改用配置好25mg/ml强力霉素悬浊液。到预定时间时处死取脑组织用10%甲醛固定。1.3标本处理及免疫组化染色标本固定24h后，取针眼为中心厚1cm的冠状切片，石蜡色埋，在切片机上连续切片，片厚3mm，做CD34、MMP9免疫组化染色，

5、具体步骤根据试剂盒说明书操作。1.4结果判定每张切片先用低倍镜确定新生微血管密集区域，再计数随机5个高倍视野（400×）下CD34阳性血管总数取平均值作为该切片新生微血管计数［5］；取不同5个区域MMP9阳性区平均灰度值均值作为该切片MMP9值。1.5统计学方法用SPSS10.0统计软件分析，数据用±s表示,组间比较用t检验,组内比较用单因素方差分析，两两比较用最小显著差法（LSD）检验。α=0.05为检验水准。2结果2.1CD34免疫组化染色各组间的比较差别有统计学意义（P0.05）。3dCD34阳性新生血管计数最多且模型组比对照组明显多，后逐渐减少，对照组12d时消失；干预组7d时比

6、模型组略少，12d时显著减少。见表1。表1各组CD34阳性的新生血管数均值（略）注：同一时间点与模型组比较，*P0.05；同组间7d与3d比较，▼P0.05；7d与12d比较，▽P0.052.2MMP9免疫组化染色各组间的比较差别有统计学意义（P0.05）。模型组3d时值最大，7d时维持高水平，12d时仍然有效表达。较对照组值跟模型组比3d时明显小，并迅速减少，12d时只有较少量表达；干预组7d时比模型组有所减少，12d时显著减少。见表2。表2各组MMP9阳性区平均灰度值均值（略）注：同一时间点与模型组比较，*P0.05，同组间7d与3d比较，▼P0.05；7d与12d比较，▽P0.05

7、3讨论血管生成是残存的血管内皮细胞增殖和迁移的过程：由血管内皮细胞和外膜细胞激活与分离,细胞外基质的降解;内皮细胞发芽,移行和增生并重新组合连接形成新的血管腔（在两相邻的内皮细胞未完全发育形成紧密连接时,表达CD34紧密连接形成成为CD34阴度血管［6］）外膜细胞沿着新生血管外移行,新生血管形成［7］。在血管生成过程中内皮细胞的增殖和外周细胞外基质的降解同时进行［7］，细胞外基质含有丰富的胶原蛋白,溶解胶原是