大鼠脑出血后mmp9对血管生成影响

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1、大鼠脑出血后MMP9对血管生成影响作者：方李鸿娄季宇白宏英曾志磊仲玉洁刘海涛郭耀强【摘要】目的探讨脑出血后MMP9对血管生成的影响。方法采用立体定向技术作大鼠脑出血模型，用免疫组化方法测定脑出血后CD34阳性新生微血管及MMP9表达。结果MMP9阳性区平均灰度值高CD34阳性新生血管较多。结论脑出血后MMP9可能是促血管生成因子，强力霉素能通过调节MMP9的表达与活性影响血管生成。【关键词】脑出血；血管生成；强力霉素；MMP9；CD34【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectofMMP9inangiogenesisaf

2、tercerebralhemorrhage.MethodsWeemployedthestereotactictechniquetomakemodelsofthecerebralhemorrhageofmice.ThelevelofMMP9andthesituationofCD34masculinenewbornmicrovesselswithimmunohistochemistryafterICHweretested.ResultsDuringthisprocession,thelevelofMMP9washigher,thenumberofCD34masc

3、ulinevesselswaslarger.ConclusionMMP9maybethefactortopromotetheangiogenesisaftercerebralhemorrhageanddoxycyclingcanaffecttheangiogenesisbyadjustingtheexpressionandactivityofMMP9.9　　【Keywords】Cerebralhemorrhage；Angiogenesis；Doxycycline；CD34；MMP9　　MMP9（matrixmetalloproteinase9,MMP

4、9）是作用于血管内皮细胞基质的主要成分Ⅳ型胶原蛋白酶，以往研究认为它是血管损伤因子参与脑水肿的发生发展，但体外研究发现MMP9与血管平滑肌的增值、迁移有关［12］；此外，最新研究发现MMP9表达上调可促进乳腺癌新生血管的形成［3］。本研究尝试用广谱基质蛋白酶抑制剂强力霉素干预，观察不同时间点MMP9表达及CD34阳性新生微血管，探讨MMP9在大鼠脑出血后血管生成中的作用。　　1材料和方法　　1.1材料（1）实验动物：雌性SD大鼠48只由郑州大学动物中心提供，体质量（340±30）g。（2）药品：盐酸多西环素（强力霉素）片购自江苏联环药业股份有限公司，生产

5、批号H32021266。（3）试剂：鼠单克隆抗体试剂盒CD34、MMP9购于北京中杉生物工程公司，其他试剂。（4）仪器：立体定位仪，100μl微量进样器，温箱，显微镜，微波炉。　　1.2方法948只大鼠分随机分3组：对照组和模型组各18只分3d、7d、12d3个时间点；干预组12只分7d、12d2个时间点。参照Rosenberg等［4］方法，用10%水合氯醛腹腔注射麻醉（35mg/100g动物体质量）后固定在立体定位仪上，备皮消毒后暴露颅骨在前囟向前0.2mm矢状缝向左旁开3mm，用牙科钻钻开颅骨不伤及硬脑膜，再用100μl微量进样器抽取80μl的自体未凝动脉血

6、（对照组注入等量生理盐水），从已钻孔垂直进针6mm（相当于尾状核）缓慢注入后保留10min拔出，缝合切口；模型造成后用Longa评分达到1分入选；生理盐水（剂量1.2ml/100g动物体质量）灌胃1次/d；干预组第5天改用配置好25mg/ml强力霉素悬浊液。到预定时间时处死取脑组织用10%甲醛固定。　　1.3标本处理及免疫组化染色标本固定24h后，取针眼为中心厚1cm的冠状切片，石蜡色埋，在切片机上连续切片，片厚3mm，做CD34、MMP9免疫组化染色，具体步骤根据试剂盒说明书操作。　　1.4结果判定每张切片先用低倍镜确定新生微血管密集区域，再计数随机5个高倍视

7、野（400×）下CD34阳性血管总数取平均值作为该切片新生微血管计数［5］；取不同5个区域MMP9阳性区平均灰度值均值作为该切片MMP9值。　　1.5统计学方法用SPSS10.0统计软件分析，数据用±9s表示,组间比较用t检验,组内比较用单因素方差分析，两两比较用最小显著差法（LSD）检验。α=0.05为检验水准。　　2结果　　2.1CD34免疫组化染色各组间的比较差别有统计学意义（P<0.05）。3dCD34阳性新生血管计数最多且模型组比对照组明显多，后逐渐减少，对照组12d时消失；干预组7d时比模型组略少，12d时显著减少。见表1。　　表1各组CD3

8、4阳性的新