正常成年大鼠脑内环氧合酶

《正常成年大鼠脑内环氧合酶》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、正常成年大鼠脑内环氧合酶作者：汪丙昂，赵振伟,孟新文【关键词】环氧合酶　　Expressionofcyclooxygenase2inthebrainsofnormaladultrats　　【Abstract】AIM:Toobservetheexpressionofcyclooxygenase2(COX2)inthebrainsofnormaladultrats.METHODS:TheimmunohistochemicalABCmethodandtheCOX2polyclonalantibodyaladultrat

2、s.RESULTS:Therepus,thedentategyrus,thesupraopticnucleus,theamygdaloidnucleus,cerebellumandbrainstem,andsoon.TheCOX2immunopositivecellsainlyneurons,andafemunocytochemistry　　【摘要】目的：观察正常大鼠脑内环氧合酶2（COX2）的表达.方法：用自行制备的COX2多抗采用免疫组织化学ABC法观察了COX2蛋白在正常成年大鼠脑内的表达.结果：在正常成年

3、大鼠脑内COX2蛋白主要表达于皮层、海马、齿状回、视上核、杏仁核、小脑和脑干等部位，阳性细胞主要为神经元，神经胶质细胞染色很少.结论：COX2蛋白在脑内广泛分布.　　【关键词】环氧合酶2；大鼠；免疫细胞化学　　0引言　　环氧合酶（COX）是前列腺素生成的限速酶，有两个异构体：环氧合酶1（COX1）和环氧合酶2（COX2）.COX2具有重要的生物学作用，由其催化生成的前列腺素是机体内重要的第二信使；COX2与神经免疫调节、突触可塑性［1］以及痛觉敏感性［2］有关，并被作为抗炎治疗的靶标.但目前关于COX2蛋白在正常

4、大鼠中枢神经系统表达分布的报道还很少，而且COX2在神经系统的许多重要功能的细节还有待进一步阐明.我们用COX2多抗观察正常大鼠脑内COX2蛋白的表达如下.　　1材料和方法　　1.1材料雄性SD大鼠6只，体质量180~250g，由第四军医大学实验动物中心提供.聚苯乙烯ELISA板购自于美国Nunc公司.COX2的多克隆抗体由我们制备［3］.　　1.2方法大鼠用10g/L戊巴比妥钠（60mg/kg）麻醉后开胸，经心灌流，先用100mL生理盐水快速灌注冲洗血液，然后用预冷的40g/L多聚甲醛固定液400mL灌流.待固

5、定液滴注完毕，取出全脑，用40g/L多聚甲醛后固定2h，再放入200g/L蔗糖溶液，4℃过夜.组织块完全沉底后用冰冻切片机连续冠状切片，每5张取1张，脑片厚50μm.先将所有切片经0.01mol/LPBS漂洗5min×3次后，浸入800mL/L甲醇和3mL/L过氧化氢封闭30min，0.01mol/LPBS漂洗10min×3次，再用10g/L牛血清白蛋白和30mL/L羊血清和3mL/LTritonX100封闭1h，用ABC方法进行免疫组化染色.免疫兔血清（1∶1000）作为一抗，孵育切片，室温下36h，0.01m

6、ol/LPBS漂洗10min×3次；生物素化的羊抗兔IgG（1∶500，Sigma公司）孵育切片，室温下4h，0.01mol/LPBS漂洗10min×3次；生物素卵白素辣根过氧化物酶复合物（ABC，1∶500，Vector公司）孵育切片，室温2h，0.01mol/LPBS漂洗10min×3次；硫酸镍胺加强DAB蓝色反应呈色.当阳性产物呈深蓝色而背底几乎无色时终止反应.经脱水、透明和封片后，OlympusBH2显微镜镜检.部分切片用做免疫组化方法对照实验，一抗用牛血清白蛋白稀释液替代，二抗、ABC复合物同其他免疫组

7、化反应切片，结果未见阳性.2结果　　在正常成年大鼠脑内COX2的分布比较广泛（图1）.阳性细胞主要为神经元，没有见到明显的胶质细胞呈现COX2免疫阳性染色.但是还有一些不明类型的细胞也表达COX2.　　A:皮层;B:海马;C:齿状回;D:小脑;E:杏仁核;F:下丘脑视上核.　　图1COX2在正常成年大鼠脑内的表达ABC×140（略）　　在大脑皮质，COX2阳性细胞为神经元样形态，皮质6层均有分布，阳性细胞胞体呈锥形、类圆形或不规则形，突起较长.其中外颗粒层和内、外锥体层的细胞染色最强，突起明显.而其余各层的阳性细

8、胞染色很淡，突起也不明显.海马CA1CA4区许多细胞为COX2免疫阳性，阳性细胞染色中等，形态不规则；齿状回也有许多颗粒细胞呈现明显的COX2阳性染色.正常大鼠的视上核也有许多细胞呈现COX2阳性染色，染色中等，细胞形态多数为神经元样.丘脑背侧核群、下丘脑视前区和室旁核也有散在分布的染色很淡的阳性细胞，杏仁核也有少量细胞呈现COX2阳性染色.中脑导水管周围灰质和蓝斑均有C