针刺对运动性失眠大鼠大脑cfos及cjun含量的影响

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1、针刺对运动性失眠大鼠大脑cfos及cjun含量的影响【摘要】目的通过对运动性失眠大鼠进行针刺治疗，探讨针刺疗法治疗运动性失眠的机理和疗效。方法雌性SPF级别SD系列大鼠40只，随机分正常组、对照组、西药组和针刺组，每组10只。针刺组头部百会穴处沿督脉方向进行皮下针刺，西药组注射安定。除正常组外，对照组、西药组、针刺组大鼠进行Y型迷宫、大鼠跑台练习;1周后，在腹腔注射对氯苯丙氨酸。48h后，采用免疫组化的方法检测大鼠大脑内的c-fos和c-jun含量。结果与正常组对比，所有失眠大鼠大脑内的大脑内的c-fos

2、和c-jun均升高(P<0.05);针刺能够改善失眠，降低失眠大鼠大脑内c-fos和c-jun(P<0.05)。结论针刺疗法可能是通过调节大脑内c-fos和c-jun的表达来治疗运动性失眠，是治疗失眠的理想方法【关键词】针刺疗法;失眠大鼠;c-fos;c-jun睡眠是人类基本的生理需求，良好的睡眠可以促进机体迅速恢复体力和脑力，维持正常的生命节律。大强度的运动负荷对运动员来讲，是一种不良的刺激，运动员在训练和比赛过程中经常会出现失眠现象，称为运动性失眠。它是由运动训练或体育竞赛等相关因素所导致的失

3、眠，引起运动员睡眠的时间缩短。又是导致运动性疲劳的主要原因，从而严重影响运动员的训练质量和运动成绩，并对运动员的身心健康造成很大影响。　　运动员属于特殊群体，采用不当的治疗手段会对运动员的训练和比赛甚至尿检造成影响，我国传统中医针刺治疗手段具有副作用少，疗效好，整体调理性强的特点。运用传统的中医针刺治疗手段进行疗效研究，以减轻运动后失眠现象对运动员的身心健康的影响，提高运动员的训练和比赛成绩，具有重要意义。本文拟从针刺对大鼠大脑内c-fos和c-jun的表达的影响这两个方面探讨中医针刺疗法治疗失眠的机理。1材

4、料　　1.1动物采用SPF级别SD大鼠40只，雌性，体重(180±50)g,由南方医科大学动物实验中心提供，将所有大鼠按体重编号，并由SPSS生成随机数字，将所有大鼠分成4组，分别是正常组、对照组、西药组和针刺组，每组10只。置于SPF实验室，自由摄食、饮水。室温22℃。保持自然光照，适应性饲养2周，以利环境习服。　　1.2药品对氯苯丙氨酸(DL-4-Chlorophenylalanine)，由Sigma公司生产，安定由广州陆军总医院购买。实验所需试剂和测试由广州威佳公司提供试剂盒与技术支持;针刺等用品均由广

5、州中医药大学提供。　　2方法　　2.1实验过程实验开始第1周，除正常组外，其余3组每只大鼠进行每天15次的Y型迷宫测试，并进行20min的大鼠跑台(20m/s),使其在体力和脑力方面达到疲倦。针刺组头部百会穴处皮下针刺沿督脉方向针刺，1次/d，每次留针20min，7d后，最后一次针刺结束后，沿督脉方向，以百会穴为中心，皮下埋羊肠线1.5cm。对照组予安定灌胃，25mg/kg，灌胃1周。　　1周后，早上8：00开始，将针刺组和对照组大鼠按编号顺序，35mg/kg腹腔注射对氯苯丙氨酸[1]。并将所有大鼠按分组正常

6、饲养。　　48h后用10%水和氯醛，麻醉后剖开胸腔，经升主动脉快速灌注37℃生理盐水250ml，然后滴注含4℃4%多聚甲醛的磷酸缓冲液300ml(pH7.4)，30min灌流完毕，立即断头取脑，置于上述同样固定液中固定7h，入20%蔗糖液中过夜，在行恒冷箱切片(-20℃)。　　2.2免疫组化染色0.01mol/LPBS中洗10min，3次，0.3H2O2-PBS液中漂洗15min，加5%羊血清封闭，37℃孵育30min，滴加兔抗多克隆fos抗体和兔抗多克隆jun抗体，37℃孵育2h，0.01mol/LPBS中

7、洗10min，3次,入生物素化羊抗兔IgG(1∶150)孵育1h(37℃),PBS洗10min，3次，再入SABC复合物中孵育1h(37℃)。PBS洗10min，3次,DAB显色，重蒸水终止染色10min,然后脱水、透明、甘油封片。　　2.3c-fos和c-jun阳性细胞计数每例脑标本特定部位选取3张切片，定点计数5个高倍视野，在显微镜下(10×10倍)，观察5个视场的阳性细胞。对c-fos和c-jun阳性细胞显微镜下计数，计数相应区域同一视野(海马区)，相同面积内阳性细胞数，取平均值进行统计学分析。　　2.

8、4统计分析对所测试指标进行单因素方差分析。主要采用SPSS13.0进行。　　3结果　　实验结果表明，与正常组对比，所有失眠大鼠大脑内的c-fos、c-jun水平均降低(P<0.05)，提示c-fos、c-jun可以减轻失眠的发作,对失眠大鼠大脑具有保护作用。针刺能够降低失眠大鼠大脑内c-fos和c-jun水平(P<0.05)。针刺可能通过癫痫大鼠大脑内的c-fos和c-jun水平而减轻失