醛糖还原酶基因多态性与2型糖尿病及视网膜病变的相关性

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1、醛糖还原酶基因多态性与2型糖尿病及视网膜病变的相关性【摘要】目的探讨2型糖尿病醛糖还原酶（AR）基因5′端(AC)n多态性与2型糖尿病（DM）并发背景型视网膜病变（BDR）的关系。方法随机选取DM患者74例，其中并发BDR39例，无视网膜病变35例，正常对照组40例。经多聚酶链反应（PCR）琼脂糖凝胶电泳，检测AR基因5′端（AC)n多态性标记。结果①在2型糖尿病患者和正常对照组中共检测出7种等位基因，其中以Z、Z＋2、Z-2三种等位基因最常见。②Z-2等位基因在BDR组高于NDR组和CON组；Z+2等位基因在BDR

2、组低于NDR组和CON组。结论山东地区2型DM患者AR基因5′端(AC)n存在7种等位基因，Z-2等位基因可能是BDR的易感基因，Z+2等位基因可能为其保护基因。【关键词】糖尿病，2型；醛糖还原酶；基因；视网膜病变　　Abstract：ObjectiveTostudytherelationshipbetorphismof(AC)ninthe5′endoftheARgeneandbackgrounddiabeticretinopathy(BDR).Methods74patientsellitus(DM),39inethe

3、polymorphismmarkerof(AC)ndinucleotideinthe5′endoftheARgene.Results①7alleles,mostlyZ,Z＋2,andZ-2allelesellitusandcontrols.②FrequencyofalleleZ-2,theZ-2allelemightbethesusceptiblegeneandtheZ＋2allelemightbetheprotectivegene.　　KeyericanDiabetesAssociation,ADA）的糖尿病诊断和分

4、型标准，随机选择千佛山医院2006年7月～2007年6月住院及门诊2型糖尿病患者74例，其中男42例，女32例，平均年龄（59.2±12.1）岁。经临床检查排除糖尿病急性并发症、感染、手术等应激情况，无其他慢性肾脏疾病、高血压、冠心病和恶性肿瘤。所有患者均由2名特定的眼科医生经扩瞳直接眼底镜检查眼底，部分患者行眼底荧光造影，依照1985年全国第三届眼科学会议标准排除增殖型糖尿病视网膜病变者，分为：①背景型视网膜病变（backgrounddiabeticretinopathy,BDR）者39例，男23例，女16例，平均年

5、龄（59.6±11.3）岁，平均病程（3.4±1.3）年；②糖尿病无视网膜病变（nondiabeticretinopathy,NDR）者35例,其中男19例，女16例，平均年龄（58.7±13.1）岁，平均病程（14.4±3.1）年。正常对照(CON)组:40例，男22例，女18例，平均年龄（56.8±13.5）岁，均为无糖尿病、糖耐量异常、高血压、冠心病、肥胖及其它眼底病变，3代内无糖尿病家族史的同期健康体检者。　　1.2方法　　1.2.1一般临床资料　　所有研究对象均测量身高、体重，并计算体重指数（BodyMas

6、sIndex，BMI）。全自动生化仪测血脂、血糖。高压液相法测糖化血红蛋白。　　1.2.2DNA提取　　取2%EDTA抗凝的外周静脉血1?mL，应用北京天根公司TIANampBlood血液基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。　　1.2.3PCR扩增目的基因片段　　5′端及3′端引物分别为ARPr1：5′GAATCTTAACATGCTCTGAACC3′,ARPr2:5′GCCCAGCCCTATACCTAGT3′，由上海博亚生物有限公司合成。扩增条件为94?℃始变性5?min，94?℃变性30?s，55?℃

7、退火45?s，72?℃延伸90?s，共循环30个周期，72?℃终末延伸10?min。反应总体积为50?μL：5?μL10×PCR缓冲液，0.25?μg模板DNA，两个引物各1?μmmol/L，4种dNTPs各0.15?mmol/L，TapDNA聚合酶1?U，加无菌蒸馏水至50?μL反应体积。　　1.2.4PCR反应产物电泳　　反应产物在1%琼脂糖凝胶上电泳，根据迁移距离确定样品所属等位基因。本研究把扩增出的138?bp长的DNA片断命名为Z等位基因，那么Z+2等位基因将比Z等位基因长(AC)2个bp，Z-2等位基因将

8、比Z等位基因短(AC)2个bp，并依次类推［6］。　　1.3统计学处理　　临床计量资料采用±s表示，组间比较用t验。AR等位基因数目用直接计数法，并计算等位基因频率分布用χ2检验，检验水平为P＜0.05差异有统计学意义。　　2结果　　2.1病例及对照组一般临床及实验室资料　　见表1（略）。3组间性别构成、年龄、体重指数、糖尿病家