回流法与超声法对清脂颗粒有效成分提取比较研究

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1、回流法与超声法对清脂颗粒有效成分提取比较研究【摘要】　　目的:比较不同方法对清脂颗粒中有效成分进行提取，筛选最佳条件。方法:采用正交设计实验法，以高效液相色谱（HPLC）法测定有效成分含量，比较提取率。结果:清脂颗粒中有效成分的最佳提取条件超声法为加6倍量的80％的乙醇，提取3次，每次提取30min。结论:所确定的提取条件稳定可行。【关键词】提取正交设计清脂颗粒有效成分　　清脂颗粒是由制首乌、决明子、山楂等药配伍而成，用于痰浊阻滞型高脂血症。本实验研究是根据处方中药材所含有效成分的性质，通过回流法和超声法进行提取，确定清脂颗粒中的乙醇提取条件。分别采用正交实验探讨乙醇倍数、提取时间

2、、提取次数和加醇含量作为考察因素，以2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷，大黄素，熊果酸含量为检测指标，对两个方法进行比较，报告如下。　　1仪器与对照品　　1.1主要仪器　　LC-10AT型液相色谱仪泵主机（日本岛津）；SPD-10A型紫外检测器（日本岛津）；N-2000色谱工作站（浙江大学智达公司）；万分之一电子天平（美国PE公司）；SB2200-T型超声波清洗器（上海奥特赛恩斯仪器公司）。　　1.2对照品　　大黄素对照品，110756-200110；2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄糖苷，110844-200404；熊果酸，110742-

3、200527。均购于中国药品生物制品检定所。　　2实验部分　　2.1正交实验设计　　优选提取工艺条件，按每份试验1日用量称取制首乌、决明子、山楂等药材以L9（34）正交表率选，每方法共试验9份。　　其因素水平安排见表1，结果见表2。　　表1清脂颗粒剂提取工艺因素水平表（略）　　2.2有效成分指标含量测定［3，4］　　2.2.12，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷　　色谱条件和系统适应性实验：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以乙腈-水（13:87）为流动相，检测波长为320nm。理论踏板数以葡萄苷峰计应不低于2000。　　对照品溶液的制备：精密称取葡萄苷对照品适量，加

4、稀乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。　　供试品的制备：取本品粉末约0.5g，精密称定，具塞锥型瓶中，精密加入稀乙醇10ml，称定重量，超声30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失重量，滤过，取上清液，即得。　　测量法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。　　本品按照干燥品计算，含2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷（C2OH22O9）不得少于0.70％。　　2.2.2大黄酚，大黄素　　色谱条件和系统适应性实验：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.1％磷酸溶液（85：15）为流动相，检测波长254nm。理论踏板数

5、以大黄素,大黄酚峰计应不低于3000。　　对照品溶液的制备：精密称取大黄酚，大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。　　供试品的制备：取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇10ml，称定重量，超声处理30min，放冷再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　　测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。　　2.2.3熊果酸［5，6］　　色谱条件和系统适应性实验：以十八烷基键合硅胶为填充剂，以乙腈-水-磷酸溶液（85：14.95：0.05）为流动相，检测波长210nm。理论踏板数以熊果酸

6、峰计应不低于3000。　　对照品溶液的制备：精密称取熊果酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，即得。　　供试品的制备：取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇10ml，称定重量，超声处理30min，放冷再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　　测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。　　2.3方差分析　　根据表2，3的结果，将三指标含量之和作为综合含量进行方差分析。　　表2回流提取2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷、大黄素、熊果酸含量测定正交实验设计与结果L9（34）（

7、略）　　表3超声提取2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄苷、大黄素、熊果酸含量测定正交实验设计与结果L9（34）（略）　　2.4工艺条件的确定　　从方差分析结果可知，清脂颗粒制首乌、决明子、山楂的醇提条件中，提取方法、乙醇倍数、提取时间均无显著差异（P>0.05），提取次数和乙醇浓度具有显著性差异（P<0.05），各因素的作用的主次为乙醇浓度>提取次数>提取倍数>提取方法>提取时间，较适宜的因素为：乙醇浓度2提取次