清化瘀毒法对大鼠肝纤维化进程的干预作用论文

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1、清化瘀毒法对大鼠肝纤维化进程的干预作用论文李燚光，代海峰，薛博瑜，尚文斌【摘要】目的研究紫七软肝片对实验性大鼠肝纤维化进程的干预作用。方法用40%CCl4皮下注射和高脂饲料及酒精喂养造成大鼠肝纤维化模型。随机分为空白对照组、模型组、紫七软肝片组、大黄虫丸组和秋水仙碱组，造模同时灌胃给药干预，共6周。实验第4周末及结束以后，各取血清、肝组织，检测Hyp的含量.freelg/片。④四氯化碳(CCl4)分析纯：上海化学试剂有限公司生产。⑤透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PcⅢ)放免试剂盒，上海海研医学生物技术有限公司

2、生产，批号：20071201。1.3仪器与设备Vital-200全自动生化分析仪，荷兰产品。DFM-96型10管放射免疫γ-记数仪，合肥众成机电技术开发有限责任公司产品。图像分析系统，瑞医科技产品。2方法2.1肝纤维化大鼠模型的制备参照韩德伍2，3等应用CCl4攻击方法制备改进：以40%CCl4橄榄油溶液，首剂5ml/kg，其后3ml/kg皮下注射，隔3天1次，连续6周(共11次)，同时高脂饲料(89.5%玉米面+0.5%胆固醇+10%猪油)及10%的酒精喂养。2.2实验分组与给药方案100只SD大鼠随机分5组，每组20只，雌

3、雄各半，分笼饲养，空白对照组(K)以普通饲料及自来水自由喂养，不作任何处理;其余所有大鼠给予高脂饮食及10%的酒精喂养。其中模型组(M)造模开始同时灌服生理盐水，紫七软肝片组(Z)造模开始同时灌服紫七软肝片水剂，给药剂量为3g/kg;大黄虫丸组(D)造模开始同时灌服大黄虫丸汤剂，给药剂量为0.9g/kg;秋水仙碱组(Q)造模开始同时灌服秋水仙碱，剂量为0.1mg/kg。所有给药组给药剂量为成人临床剂量，根据体型系数按公式换算出大鼠等效剂量4，所有灌胃大鼠均为每日中午灌胃1次，灌胃量为1ml/100g，共6周。2.3标本采集在造

4、模第4周末处死半数大鼠，第6末周末即实验结束时处死余下各组所有大鼠。处死取材方法：末次CCl4造模后第3天，禁食12h，1%戊巴比妥钠麻醉，颈动脉分离、采血，离心、取血浆或血清后-20℃保存待检;取完整肝脏，并从肝右叶切取3块肝组织，第1块用10%中性甲醛固定，制备石蜡切片，备作常规HE、VG染色，其他两块分别迅速标记放入液氮中保存待检。2.4观察指标及方法①动物一般情况;②肝功能指标;③肝纤维化指标：HA、LN、PcⅢ;④病理组织学观察5;标本处理：血清可直接取50μl进行测定;肝组织须称取肝组织湿重0.08～0.1g，按重

5、量体积比加入9倍体积的生理盐水制成10%的组织匀浆，2500r/min，离心10min，直接取大鼠肝组织匀浆50μl进行测定。具体操作步骤按试剂盒说明书进行。2.5统计学处理应用SPSS13.0软件包进行统计分析。计量资料以±s表示，结果采用完全随机设计资料的方差分析方法进行，先进行方差齐性检验，方差齐时采用S-N-K法进行均数间两两比较，方差不齐时用Dun'sC法进行均数间的两两比较，均P0.05认为差异有显著性。计数资料组间比较采用等级秩和检验。3结果3.1大鼠死亡情况大鼠死亡主要在造模第3，4周，尤其每次造模第2，3天为

6、甚，模型组总死亡率35%;大黄虫丸组死亡率为25%;秋水仙碱组大鼠死亡率为30%;紫七软肝片组死亡率为15%。3.2大鼠血清肝功能的影响模型组ALT、AST、TBIL、ALP、GGT在不同阶段均显著升高，各给药干预组的的测定指标教模型组偏低。4周末时，紫七软肝片组和秋水仙碱组AST、ALT、TBIL较模型组均有显著差异(均为P0.05)，大黄虫丸组在降低ALT及TBIL较模型组均有显著差异(P0.05，P0.01)。6周末时，紫七软肝片组AST、ALT及TBIL、ALP、GGT较模型组均有显著差异(P0.05，P0.01);大

7、黄虫丸组TBIL及GGT较模型组有显著差异(P0.05)，秋水仙碱组ALT、TBIL、GGT较模型组均有显著差异(P0.05，P0.05，P0.01)。3.3大鼠血清肝纤维化指标的影响见表1。表1因素水平3.4大鼠肝组织羟脯氨酸(Hyp)的变化见表2。表2大鼠肝组织匀浆羟脯氨酸(Hyp)含量的变化3.5大鼠肝脏病理组织学观察在肝脏病理学方面，通过HE和VG两种染色方法观察，发现空白对照组大鼠肝脏组织学均无明显异常。模型组大鼠4周主要呈较重小叶内和汇管区的肝细胞脂肪变性、炎症细胞浸润，部分出现桥接坏死，坏死区有较多量的炎细胞浸润

8、;坏死区附近有的肝细胞体积大，核大深染，包浆嗜碱性，纤维化程度在1～3期。给药干预组较模型组炎症减轻，但无显著差异;各组肝纤维化度减轻，其中紫七软肝片组较模型组有显著差异。6周末时，模型组大鼠肝脏脂肪变性较前减轻，中央或局部有中性粒细胞、单核细胞或浆细胞浸润，可见程度不等、范