肾康丸对糖尿病肾病大鼠肾脏tgfβ1-smad 7通路的影响论文

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1、肾康丸对糖尿病肾病大鼠肾脏TGFβ1/Smad7通路的影响论文【摘要】目的探讨肾康丸对糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏TGFβ1/Smad7信号通路的影响。方法用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射法诱导建立大鼠糖尿病（DM）模型，模型成功后随机分为3组：模型对照组、开搏通组、肾康丸组，另设正常对照组。治疗8周后，取大鼠肾脏，采用免疫组化法观察各组大鼠肾脏组织纤连蛋白（FN）、转化生长因子β1（TGFβ1）和Smad7蛋白表达的情况。结果8周后，DN模型组大鼠与正常大鼠比较，肾脏组织中FN和TGFβ1蛋白表达明显增加，Smad7蛋白表达明显减少

2、。肾康丸和开搏通都可以减少FN和TGFβ1蛋白的表达.freelad7蛋白的表达。结论肾康丸可以抑制DN大鼠肾脏中TGFβ1/Smad信号传导通路的激活，减少ECM的沉积，从而延缓DN进程。【关键词】肾康丸；糖尿病肾病；TGFβ1/Smad信号通路Abstract:ObjectiveToexploretheeffectsoftheShenkangad7signalingpathodelslydividedinto3groups：modelcontrolgroup；CapotengroupandShenkangeotherratsalc

3、ontrolgroup.Allratsinisteredinistration，thekidneysoftheratsad7ethodofimmunehistochemistry.ResultsTherenaltissueproteinexpressionsofFNandTGFβ1intheratsofDNmodelgroupalgroup.）患者临床常见而难治的微血管并发症，是导致终末期肾病（ESRD）和DM患者死亡的主要原因［1］。如何有效预防DN发生发展,具有重要意义。肾康丸在临床治疗DN患者多年，疗效确切。临床观察和动物实验研究都

4、表明，该药在一定程度上可改善DN一般症状，保护肾脏，延缓DN的进展［2，3］。本研究通过动物实验，从TGFβ1/Smad信号通路出发，进一步探讨肾康丸治疗DN的作用机制，为其临床应用提供实验依据。1材料与方法1.1实验动物SPF级2135型超薄组织切片机、DMIRB型倒置显微镜、MPS30型照相机，LEICA公司。1.4方法按65mg·kg-1腹腔内一次性注射链脲佐菌素（STZ）制作DM大鼠模型。STZ用枸橼酸钠缓冲液（0.1mol·L-1，pH4.5）配制。另设正常对照组（n＝8只）。连续喂养2周，测血糖、尿糖、尿量，若血糖值高于16

5、.7mmol·L-1、尿糖（+++）以上、尿量增加1倍以上，则造模成功。造模成功后，随机分为3组：模型对照组、开搏通组和肾康丸组。开搏通、肾康丸组分别按5mg·kg-1、1.2g·kg-1（按照人与大鼠体表面积换算，分别相当于70kg成人37.5mg·d-1、12g·d-1）质量灌服相应药物，连续8周。对照组灌服等容积生理盐水。末次给药后12h，麻醉，取左肾，10%(φ)甲醛中性缓冲液中固定，待做免疫组化检测。1.5观察指标和测定方法1.5.1免疫组化法检测肾脏组织FN蛋白的表达采用SABC免疫组化检测方法。肾组织10%(φ)甲醛中性缓冲液

6、中固定24h；将固定好的标本置于梯度酒精和二甲苯浸泡；50～60℃浸蜡1～2h，冷却，修块，切片，按实验分组编号，烤片（80℃，2h）；常规脱蜡；滴加复合消化液进行抗原修复；滴加5％BSA封闭液，室温，20min；依次滴加FN一抗、二抗后，与SABC结合；DAB显色；脱水，透明，中性树胶封片；在显微镜下观察、拍照。阴性对照以PBS代替一抗，其余步骤同上述各步。1.5.2免疫组化法检测肾脏组织TGFβ1、Smad7蛋白的表达方法同FN蛋白的测定，只是抗原修复用0.01mol·L-1枸橼酸枸橼酸钠缓冲液（pH6.0）进行，一抗分别为兔抗大鼠

7、TGFβ1多克隆抗体和兔抗大鼠Smad7多克隆抗体。2结果2.1大鼠肾脏组织FN蛋白表达情况正常组大鼠肾脏FN在肾小球基底膜、系膜基质区有微弱表达，着色较浅。模型组在肾小球基底膜、系膜基质区有极强阳性表达，着色极深，说明FN蛋白表达增强。各治疗组FN在上述部位有弱阳性表达，着色较浅，说明经肾康丸和开搏通治疗后可以减少DN大鼠FN蛋白的表达。见图1。2.2大鼠肾脏组织TGFβ1蛋白表达情况正常组大鼠肾脏在肾小球和肾小管上皮细胞中均有TGFβ1蛋白表达，但量较少，着色较浅。模型组大鼠在上述部位的TGFβ1蛋白表达量增加，呈极强阳性表达，

8、着色较深。各治疗组TGFβ1在上述部位也有弱阳性表达，介于正常大鼠和模型大鼠之间，说明经肾康丸和开搏通治疗后可以减少DN大鼠TGFβ1蛋白的表达。2.3大鼠肾脏组织Smad7